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出版者:John Wiley & Sons Inc

作者:Bollag, Daniel M./ Edelstein, Stuart J./ Rozycki, Michael D.

出品人:

页数:432

译者:

出版时间:1996-7

价格:193.00 元

装帧:Pap

isbn号码:9780471118374

丛书系列:

图书标签:

蛋白质
蛋白质组学
生物化学
分子生物学
实验方法
分析技术
蛋白质检测
生物技术
生命科学
研究方法

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具体描述

Protein Methods Daniel M. Bollag/ Michael D. Rozycki /Stuart J. Edelstein Reviews from the first edition "...it is very well written...would certainly be of use to undergraduate and postgraduate students entering the complex world of protein preparation and to more experienced scientists entering this field for the first time."-Biotechnology and Applied Biochemistry "The book presents these topics with loads of practical detail, so that the reader has little need to consult other reference sources to carry out the techniques described. All in all, a useful book..." -Theoretical & Applied Genetics "...clearly written with protocols that are easy to follow and the text is well spread-out and easy to read...all methods are fully referenced...a useful book for beginners at a reasonable price." -FEBS Letters This revised and expanded Second Edition of Protein Methods remains the first source for a complete summary of tested and proven protein techniques. Now divided into two parts, the book begins with the essential chapters from the first edition, updated to reflect important changes in methodology. The chapter on protein isolation includes a new section focusing on the isolation of proteins from inclusion bodies. In the second section, four new chapters are devoted to protein purification and crystallization. Chapters include Preparation for Protein Isolation Protein Extraction and Solubilization Protein Concentration Determination Concentrating Protein Solutions Gel Electrophoresis Under Denaturing Conditions Gel Electrophoresis Under ...and feature reagent items and equipment required for each method chapter "view-at-a-glance" tabs illustrations for all gel applications and other methods complete supplier list appendices of basic chemical parameters and molecular data key references descriptive tables Safety notes.

好的，这是一份针对一本名为《Protein Methods》的图书所撰写的、内容详尽的、不包含任何提及该书本身或AI痕迹的图书简介，专注于介绍一个假想的、内容丰富的相关领域图书。 --- 生物化学与分子生物学前沿：现代蛋白质组学与结构生物学实践指南探索生命的基石：蛋白质的复杂世界在生命科学的宏伟蓝图中，蛋白质无疑是执行几乎所有生命功能的核心分子机器。从催化代谢反应到传递遗传信息，从构建细胞骨架到抵御病原体，蛋白质的结构、功能及其相互作用决定了一个生物体的健康与命运。随着技术革命的不断深入，我们对蛋白质组的理解正从单一分子的研究迈向高通量、系统性的分析。本书旨在为研究人员、高级学生和生物技术专业人士提供一个全面、深入且高度实用的指南，聚焦于当代蛋白质科学领域最前沿的技术、方法论和数据解析策略。本书严格侧重于实践操作的深度和理论基础的严谨性，而非理论综述。内容组织结构清晰，围绕蛋白质研究的“发现-分离-表征-功能解析”全流程展开，确保读者能够掌握将尖端技术转化为可靠实验数据的全套技能。 --- 第一部分：蛋白质的获取、纯化与定量分析本部分奠定了蛋白质研究的物质基础，详细阐述了如何从复杂的生物基质中高效、高纯度地分离目标蛋白，并对其进行精确的定性和定量评估。第一章：生物样品采集与裂解策略的优化成功的蛋白质组学研究始于高质量的起始材料。本章深入探讨了不同组织类型（如动物组织、植物组织、微生物培养物、细胞培养物）的最佳采集、保存和快速处理流程，以最小化蛋白降解和翻译后修饰（PTM）的失真。重点讨论了：新型裂解缓冲液的设计原理：针对不同类型的蛋白质靶点（如膜蛋白、核蛋白、分泌蛋白）的特异性溶解剂配方与优化。酶抑制剂的精确使用：涵盖蛋白酶、磷酸酶、糖苷酶的活性抑制策略，以及基于目标PTM的抑制剂筛选。快速冻融循环对蛋白完整性的影响评估。第二章：层析技术在蛋白质纯化中的进阶应用层析技术是蛋白质纯化的核心。本章超越基础的凝胶过滤和离子交换，聚焦于高分辨率和高通量分离策略：亲和层析（Affinity Chromatography）的定制化介质：探讨金属离子螯合层析（IMAC）的改进型配体设计、抗体亲和层析的特异性优化，以及可逆性亲和标签（如Strep-tag II）的应用深度解析。多维层析（2D LC）的串联应用：如何设计I-D/II-D/III-D的组合分离流程，以应对复杂样品中低丰度蛋白的分离挑战。模拟移动床层析（SMB）在工业规模制备中的参数控制。第三章：蛋白质的定量分析与质量评估精确的定量是后续功能研究的前提。本章详细介绍了从微量样本到大规模蛋白质组的量化方法：基于紫外吸收和比色法的浓度测定： Bradford、BCA、Lowry法原理辨析及其在不同干扰物存在下的适用性。 SDS-PAGE与Western Blotting的标准化操作：深入探讨电泳条件对蛋白质迁移率的影响，以及荧光标记与化学发光系统的定量线性范围验证。蛋白质电泳的替代方案：如Capillary Electrophoresis (CE) 的高分辨率分离能力及其在小分子肽段分析中的潜力。 --- 第二部分：蛋白质结构解析与功能验证本部分是本书的核心，深入剖析了解析蛋白质三维结构、理解其动态变化以及验证其生物学功能所需的尖端技术。第四章：质谱驱动的蛋白质组学（Mass Spectrometry-Driven Proteomics）质谱技术已成为蛋白质鉴定和修饰分析的金标准。本章侧重于高级数据采集和数据处理策略：肽段谱的数据库搜索与谱图解释：从De Novo测序到Targeted Proteomics（SRM/MRM/PRM）的实验设计与生物学重复的考量。翻译后修饰（PTMs）的鉴定与定位：特别关注磷酸化、泛素化、甲基化和糖基化的富集技术（如TiO2、IMAC磁珠）和高分辨率质谱的精确度要求。蛋白质的结构信息获取：质谱在化学交联（Cross-linking Mass Spectrometry, XL-MS）中的应用，用于解析蛋白质复合物的接触图谱。第五章：冷冻电子显微镜（Cryo-EM）与X射线晶体学实践获取高分辨率的原子结构是理解蛋白质机制的终极目标。 X射线晶体学的样品制备与优化：重点讨论晶体生长过程中的温度、缓冲液渗透压控制，以及蛋白质的同质性和稳定性要求。数据处理中对对称性和结构解析度的评估标准。冷冻电子显微镜的样品制备与数据采集流程：从玻璃化（Vitrification）的优化到电镜数据采集的低剂量技术，以及3D重建中的关键参数（如分辨率阈值、图像平均）。结合计算方法的结构解析：如何利用分子动力学模拟（MD Simulation）来解释同构酶或柔性区域的结构特征。第六章：生物物理学方法解析蛋白质动态与相互作用蛋白质的功能通常依赖于其动态变化和与其他分子的结合。本章介绍用于实时监测这些过程的物理工具：表面等离子共振（SPR）与生物层干涉测量（BLI）：深入讲解传感器表面功能化、流动室设计对动力学常数（$k_{on}, k_{off}, K_D$）准确性的影响。圆二色谱（CD）与荧光光谱分析：二级结构含量计算的限制，以及荧光探针（如ANS、Tryptophan）在监测蛋白折叠、变性和聚集过程中的应用。小角度X射线散射（SAXS）的低分辨率结构信息获取：特别是在无晶体或溶液状态下确定蛋白质复合物整体形状和柔性区段的策略。 --- 第三部分：蛋白质功能与相互作用网络的解析本部分关注如何将结构和丰度数据转化为有意义的生物学结论，解析蛋白质在生命网络中的作用。第七章：蛋白质互作组学（Interactomics）的技术拓展理解蛋白质如何形成功能性复合体至关重要。本章提供互作网络构建的多种策略：免疫沉淀（IP）与Co-IP的深度优化：探讨抗体特异性筛选、洗脱条件优化，以及高通量AP-MS（Affinity Purification coupled with Mass Spectrometry）的实验设计。酵母双杂交（Y2H）系统的改进：针对哺乳动物系统中难以应用Y2H的挑战，介绍其变体如Split-Ubiquitin System在膜蛋白互作研究中的实践。基于生物物理的互作验证：如何利用SPR/BLI对通过高通量筛选获得的互作对进行严格的亲和力验证。第八章：蛋白质活性与酶学分析的精准度控制对酶活性的定量是功能研究的核心。本章强调了排除假阳性结果的严格步骤：底物和辅因子的选择与准备：荧光猝灭底物、显色底物的使用，以及关键辅因子（如ATP、NADPH）的纯度对反应速率的影响。动力学参数的拟合与验证： Michaelis-Menten方程的适用性讨论，以及双底物反应或协同作用的分析方法。活性检测中的非酶促背景校正：阐述如何设计阴性对照以排除非特异性反应。第九章：蛋白质组学数据的整合与生物信息学工具应用庞大的实验数据需要强大的计算能力进行转化和解释。本章侧重于整合不同来源数据的实用方法：蛋白质组学数据的统计学处理：差异表达分析（Fold Change vs. P-value）、多重检验校正（FDR控制）。网络构建与拓扑分析：使用Cytoscape等工具构建蛋白质-蛋白质相互作用网络，并进行中心性（Centrality）分析以识别关键调节节点。结构与功能关联：如何将PTM位点映射到已解析的三维结构上，以预测对活性或互作域的影响。 --- 本书的编写风格注重实用性和严谨性，每一章节都包含针对特定实验步骤的“陷阱与对策”分析，旨在帮助读者避免常见错误，加速科研进程，深入掌握现代蛋白质科学的每一个关键环节。它不仅是一本方法手册，更是一部指导科学家如何提出和解决复杂蛋白质生物学问题的实践蓝图。