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出版者:Wiley-Liss

作者:Howard M. Shapiro

出品人:

页数:736

译者:

出版时间:2003-03-14

价格:USD 146.50

装帧:Hardcover

isbn号码:9780471411253

丛书系列:

图书标签:

• 流式细胞仪
• 细胞
• 生物
• 测量
• 流式
• Flow Cytometry
• Cell Analysis
• Immunology
• Biotechnology
• Laboratory Techniques
• Cell Biology
• Hematology
• Research
• Diagnostics
• Life Sciences

科学研究的基石：现代细胞分析技术前沿 图书简介 在生命科学研究的宏大图景中，对细胞——生命最基本单元——的深入理解是解锁疾病机制、开发新型疗法和推动生物技术进步的关键。本书旨在提供一个全面、深入且高度实用的指南，聚焦于一系列决定性的现代细胞分析技术，这些技术共同构成了当前生物医学研究和临床诊断的基石。本书将带领读者跨越基础理论到复杂应用的广阔领域，确保读者不仅掌握操作技能，更能深刻理解数据背后的生物学意义。 第一部分：细胞分离与纯化技术：通往精确分析的起点 在进行任何高精度的细胞功能或分子分析之前，获得高纯度的目标细胞群体是至关重要的第一步。本部分将详尽介绍当前最先进的细胞分离和纯化策略。 密度梯度离心与差异性粘附： 深入剖析Ficoll等介质在分离血液成分中的精确应用，探讨不同细胞群对特定分子（如抗体或配体）的粘附特性差异，并详述如何利用这些差异实现初步的、大批量的细胞富集。我们将讨论优化离心速度、缓冲液pH值和孵育时间对回收率和纯度的影响。 免疫磁珠分离技术（MACS）： 本章将对基于微小磁珠与特异性抗体偶联的原理进行系统阐述。重点在于如何设计高效的抗体-磁珠-细胞复合物，以及如何通过外部磁场实现阳性或阴性分选。内容涵盖试剂选择、磁铁强度对分离效率的影响、多轮洗涤策略以及如何处理那些表达低水平表面标志物的稀有细胞群。 荧光激活细胞分选（FACS）的精细操作与原理（此处不涉及流式细胞术的完整分析部分，而是侧重于“分选”本身）：虽然本指南不详述流式细胞仪的全部功能，但我们会深入探讨如何使用高精度分选仪进行物理分选。讨论多参数分选策略，例如，如何设置分选区域以排除聚集体、双阳性细胞和死细胞，以及如何优化液滴延迟时间以确保收集到的细胞具有最高活力和纯度，这对于后续的单细胞测序或功能体外培养至关重要。 第二部分：高级显微成像技术：时空分辨率的革命 现代细胞生物学研究要求我们不仅知道“有什么”，更要了解“在哪里”以及“何时发生”。本部分专注于提供最前沿的高分辨率、活细胞成像技术。 共聚焦显微成像（Confocal Microscopy）： 聚焦于如何利用针孔原理实现光学切片，从而获得无模糊的三维（3D）重建。详细解析了激光光源的选择（波长匹配荧光团）、扫描模式（如点扫描与共振扫描）对成像速度的影响，以及如何通过三维反卷积技术提高图像的信噪比。 超分辨率显微技术（Super-Resolution Microscopy）： 深入介绍如何突破衍射极限，实现纳米尺度的分子结构解析。内容涵盖： 1. STED（受激发射损耗）： 饱和点的物理原理及其在分辨蛋白质复合体中的应用。 2. PALM/STORM（光激活定位显微）： 基于单分子定位的原理，讨论如何选择合适的照片漂白剂和激发光，以及如何处理空间漂移误差，以构建高精度的细胞骨架或膜蛋白簇图谱。 活细胞成像与时间序列分析： 探讨如何设计稳定的细胞培养环境以支持长时间（数小时至数天）的活细胞观察。内容包括环境控制（CO2、温度、湿度）、光毒性最小化策略，以及使用荧光探针（如钙离子探针或ROS指示剂）进行实时动态监测和定量分析的方法学。 第三部分：定量蛋白质组学与高通量筛选：从单个分子到系统生物学 理解细胞功能的关键在于对蛋白质的精确量化及其相互作用网络的解析。本部分侧重于那些能够提供大规模、定量数据的技术平台。 基于质谱的蛋白质组学基础： 介绍如何从细胞裂解物中提取、消化蛋白质，并利用液相色谱-串联质谱（LC-MS/MS）进行蛋白质鉴定和相对/绝对定量。重点讲解标记技术（如TMT或iTRAQ）在多样本比较中的应用，以及如何处理和解读海量的质谱原始数据，确保生物学结论的可靠性。 蛋白质互作研究： 详细阐述酵母双杂交（Y2H）的局限性与优势，并重点介绍Co-IP/质谱作为体内（In Vivo）互作网络构建的主流方法。讨论如何优化抗体亲和力、洗脱条件，并利用“去噪”策略（如对照组比较）来识别可靠的蛋白质伴侣。 高内涵筛选（High-Content Screening, HCS）： 将显微成像与自动化液体处理相结合，实现平行、高通量地评估数千个小分子化合物对细胞形态、信号通路激活或特定蛋白表达的影响。内容包括：如何选择合适的成像板、图像采集的自动化脚本编写，以及至关重要的图像分析算法（如形态学特征提取、荧光强度积分）的构建与验证。 第四部分：数据解读、质量控制与规范化 任何先进的技术都必须依赖于严谨的数据分析和可靠的质量控制。本部分是连接实验操作与科学发现的桥梁。 生物统计学在生命科学中的应用： 讨论实验设计中的关键要素，如样本量估算、随机化和盲法，以确保实验结果的统计效力。深入解析常用的统计检验（如t检验、ANOVA、非参数检验）的选择标准，以及如何正确解释P值、效应量和置信区间。 数据可视化与报告规范： 强调清晰、准确地呈现复杂数据的必要性。讲解如何使用箱线图、小提琴图、热图和网络图等工具来有效传达核心信息，并遵循国际科学出版物对图表和方法学描述的最新要求。 本书面向生命科学、生物工程、药理学及生物医学工程领域的高级本科生、研究生、博士后研究人员以及资深实验室技术人员。它不仅是一本操作手册，更是一部指导思想的蓝图，旨在帮助研究者在复杂的实验体系中，设计出具有高区分度和可重复性的细胞分析方案，从而推动科学发现的进程。

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关于流式细胞介绍得非常详尽

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非常全面和详细，你几乎可以找到关于流式细胞仪的一切东西，同时给出了惊人数量的参考文献供进一步参考。可惜本书第4版删掉了如何自己制作流式细胞仪这一最有趣的部分，因此推荐第3版。

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