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页数:355

译者:

出版时间:2009-4

价格:45.00元

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isbn号码:9787030242334

丛书系列:

图书标签:

• 植物生理学
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《现代分子生物学技术：从基础到前沿》 图书简介 本书系统、全面地介绍了现代分子生物学领域中的核心技术、关键方法及其在生命科学研究中的前沿应用。旨在为生命科学、生物技术、医学以及相关交叉学科的科研人员、研究生和高年级本科生提供一本内容详实、操作性强的参考手册与学习指南。 第一部分：分子生物学核心技术基础 本部分着重于构建坚实的分子生物学实验技术基础。 第一章：核酸的提取、纯化与定量 详细阐述了从不同生物材料（如动物组织、植物组织、微生物、临床样本）中高效提取高质量DNA、RNA和蛋白质的全流程技术。重点介绍了硅胶柱层析法、酚氯仿抽提法、磁珠法等各类方法的原理、操作步骤、常见问题与故障排除。深入探讨了核酸的定量方法，包括紫外分光光度法、荧光定量（如Qubit系统）的精度与局限性。对高品质核酸的判定标准（如A260/280、A260/230比值）进行了细致的解读。 第二章：聚合酶链式反应（PCR）及其衍生技术 本章是分子生物学研究的基石。首先详述了标准PCR的反应体系优化、引物设计原则与热循环参数的精确控制。随后，系统介绍了各种高级PCR技术： 1. 实时定量PCR（qPCR/RT-qPCR）： 深入剖析了SYBR Green和TaqMan探针技术的应用差异、标准曲线的建立、内参基因的选择与验证。重点阐述了绝对定量与相对定量的计算模型。 2. 高保真PCR与长片段PCR： 探讨了如何选用高保真DNA聚合酶，以及针对复杂模板的扩增策略。 3. 数字PCR（dPCR）： 介绍其原理、仪器配置及在低丰度目标检测中的独特优势。 第三章：凝胶电泳、分离与印迹技术 本章覆盖了核酸和蛋白质的分离纯化技术。 1. 琼脂糖与聚丙烯酰胺凝胶电泳： 详细说明了不同分子量范围核酸的分离条件、电泳缓冲液的选择以及电泳图像的分析与最佳化。 2. DNA/RNA印迹（Southern/Northern Blotting）： 全面介绍探针的制备（放射性与非放射性标记）、杂交条件（温度、时间、盐浓度）的优化，以及信号的检测与图像分析。 3. 蛋白质分离与Western Blotting： 重点讲解了SDS-PAGE的原理与胶制备，抗体的选择、孵育条件，以及化学发光与荧光检测系统的比较与应用。 第二部分：基因克隆与测序技术 本部分聚焦于基因操作和高通量测序的核心方法。 第四章：基因克隆与表达载体的构建 详尽介绍了分子克隆的经典策略与现代高效方法。 1. 限制性内切酶消化与连接： 关键步骤的酶切条件、粘性末端与平末端的处理。 2. 高效连接技术： 重点介绍TA克隆、重组酶介导的连接（如Gateway系统）以及基于CRISPR/Cas9系统的靶向插入技术。 3. 载体系统选择： 比较了原核表达载体（如pET系列）、真核表达载体（如pCMV系列）和慢病毒/腺病毒载体的特点、优势与适用场景。 第五章：下一代测序技术（NGS）原理与应用 本章是理解当代基因组学和转录组学的关键。 1. NGS文库的构建： 涵盖DNA测序（WGS, WES）和RNA测序（RNA-seq）的文库制备流程，包括片段化、接头连接与富集。 2. 主流测序平台简介： 对Illumina SBS（边合成边测序）技术原理进行深入解析，并简要介绍PacBio和Oxford Nanopore等长读长测序技术。 3. 测序数据分析流程： 概述了从原始数据（FASTQ文件）到生物学结论的转化过程，包括质量控制、序列比对、变异检测（SNV, Indel）和基因表达差异分析的基础步骤。 第三部分：基因编辑与细胞生物学技术 本部分探讨精准基因修饰工具及其在细胞水平的应用。 第六章：CRISPR/Cas9基因编辑系统 本书对CRISPR/Cas9技术的原理进行了详尽的阐述。 1. 系统构建与递送： sgRNA的设计原则（靶点选择、脱靶效应预测）以及Cas9核酸酶（Cas9, Cas12a）的选择。讨论了质粒、mRNA、RNP等递送方式的效率比较。 2. 基因敲除与敲入： 阐述了如何利用非同源末端连接（NHEJ）实现基因敲除，以及如何利用同源重组修复（HDR）实现精确的基因编辑或报告基因的插入。 3. 新兴的基因编辑工具： 简要介绍碱基编辑器（Base Editing）和先导编辑（Prime Editing）相对于传统CRISPR-Cas9的优势和应用范围。 第七章：细胞培养与功能分析 本章涵盖了体外细胞实验的关键技术。 1. 无菌操作与细胞系管理： 强调了哺乳动物细胞无菌培养的严格要求、培养基的优化、传代技巧和细胞复苏冷冻保存的最佳实践。 2. 细胞转染与稳定株建立： 对脂质体介导、电穿孔法在瞬时转染和稳定细胞株构建中的应用进行了详细比较。 3. 细胞功能性分析： 介绍了通过流式细胞术（FACS）进行细胞凋亡、增殖和表面标志物分析的技术流程，以及免疫荧光/共聚焦显微镜在细胞内定位研究中的应用。 第八章：蛋白质相互作用研究技术 本章聚焦于解析细胞内复杂的分子网络。 1. 酵母双杂交（Y2H）： 详细说明了筛选策略、阳性对照和阴性对照的设计，以及如何克服“自激活”问题。 2. 免疫共沉淀（Co-IP）与蛋白质组学： 阐述了Co-IP实验中抗体选择、洗脱条件对结果纯度的影响。结合质谱技术的Co-IP（IP-MS）分析方法，用于大规模鉴定蛋白质复合物。 3. 生物物理学方法简介： 简要介绍表面等离子体共振（SPR）和表面激元共振成像（BLI）在测量蛋白质结合动力学参数（如KD, Kon, Koff）中的应用。 总结与展望 本书以严谨的科学态度和详尽的操作细节，构建了一个覆盖分子生物学核心技术脉络的知识体系。不仅强调了传统经典技术的可靠性，更紧密结合当前科研热点，深度解析了基因编辑和高通量测序等前沿技术。本书力求成为实验室中“随时可查、反复可读”的实用工具书，帮助研究人员跨越技术障碍，专注于提出创新性的科学问题。

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