Plant Cell Culture Protocols (Methods in Molecular Biology) pdf epub mobi txt 电子书下载 2026

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出版者:Humana Press

作者:Loyola-Vargas, Victor M. 编

出品人:

页数:416

译者:

出版时间:2005-11-01

价格:USD 125.00

装帧:Hardcover

isbn号码:9781588295477

丛书系列:

图书标签:

Plant Cell Culture
Plant Biotechnology
Cell Culture Protocols
Molecular Biology
Plant Science
Laboratory Protocols
Tissue Culture
In Vitro
Plant Physiology
Genetic Engineering

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具体描述

This work is a comprehensive state-of-the-art collection of the most frequently used techniques for plant cell and tissue culture. Readily reproducible and extensively annotated, the methods range from general methodologies, such as culture induction, growth and viability evaluation, and contamination control, to such highly specialized techniques as chloroplast transformation involving the laborious process of protoplast isolation and culture. Most of the protocols are currently used in the research programs of the authors or represent important parts of business projects aimed at the generation of improved plant materials. Two new appendices explain the principles for formulating culture media and the composition of the eight most commonly used media formulations, and list more than 100 very useful Internet sites.

好的，这是一份关于《Plant Cell Culture Protocols (Methods in Molecular Biology)》之外的其他分子生物学方法的图书简介，旨在提供详尽的替代性或补充性技术内容，避免提及原书的任何细节。 --- 精选分子生物学技术手册：前沿与经典方法深度解析图书名称：分子生物学实验技术：从基因组到蛋白质的高级解析策略 ISBN：（此为虚构ISBN，为排版需要）978-1-2345-6789-0 页数：约1500页定价：￥599.00 --- 内容概述本书是一部面向分子生物学研究人员、生物技术专家及高年级学生的综合性实验指南。它聚焦于当前生命科学研究中最核心、最具挑战性的几大领域：基因组编辑与调控、高通量测序数据分析、蛋白质组学深度挖掘，以及复杂生物过程的活细胞成像技术。本书摒弃了基础的分子克隆步骤，直接深入到需要精密操作和高阶分析技巧的前沿技术栈，旨在成为实验室中应对复杂实验难题的“即插即用”工具书。全书结构严谨，采用模块化设计，每个章节都由该领域的资深学者撰写，确保协议的准确性、可重复性与时效性。 --- 核心章节深度导览本书共分为六个主要部分，详细覆盖了当前分子生物学研究的热点和难点。第一部分：高级基因组操作与稳定修饰技术本部分详细介绍了超越传统载体转染的复杂基因组编辑策略。 1. CRISPR/Cas 系统的精细调控：重点阐述了如何优化 sgRNA 设计以降低脱靶效应，探讨了碱基编辑（Base Editing）和先导编辑（Prime Editing）在哺乳动物细胞和特定模式植物（如拟南芥、烟草）中的应用细则。详细描述了体内（in vivo）和体外（in vitro）的核酸酶活性检测方法，包括限制性片段长度多态性（RFLP）与高分辨率熔解曲线分析（HRM）。 2. 非整合性病毒载体系统：深入探讨了腺相关病毒（AAV）和慢病毒（Lentivirus）载体的包装优化、滴度测定（qPCR法）以及安全性评估。特别关注了如何利用这些系统进行稳定遗传修饰，而非仅用于瞬时表达。 3. 表观遗传调控的解析：详细介绍了染色质免疫沉淀测序（ChIP-seq）从样本制备到数据分析的全流程，包括针对稀有细胞群的微量ChIP优化方案。此外，还收录了对DNA甲基化（如WGBS和MeDIP）和组蛋白修饰的高特异性抗体筛选与验证流程。第二部分：高通量测序数据处理与生物信息学整合本部分聚焦于从原始数据（Raw Data）到生物学结论的转化过程，为研究人员提供实用的数据处理脚本和算法解读。 1. RNA-Seq 数据分析管线构建：提供了从 FASTQ 文件质量控制（FastQC）、比对（STAR/HISAT2）、定量（Salmon/Kallisto）到差异表达分析（DESeq2/EdgeR）的一套标准化的Linux/R脚本流程。特别包含了针对非模式生物或转录组组装的De Novo策略。 2. 单细胞测序（scRNA-seq）数据降维与聚类：详细讲解了Seurat和Scanpy工具包的高级功能，包括双细胞/双核数据去批次效应（如Harmony、BBKNN）的原理与实施，以及细胞亚群的轨迹推断（如Monocle3/PAGA）。 3. 宏基因组学与微生物组学分析：覆盖了16S rRNA测序和全基因组 Shotgun 测序（WGS）的数据处理，重点在于功能预测（PICRUSt2）和物种丰度评估（QIIME2工作流程）。第三部分：蛋白质组学与相互作用组学该部分旨在帮助研究人员精确鉴定和量化蛋白质的表达、修饰状态及其相互作用网络。 1. 基于质谱的蛋白质组学工作流程：详细介绍了细胞裂解液的优化（去盐、去脂质），以及TMT/iTRAQ多肽标记策略。着重讲解了肽段富集技术（如磷酸化肽段的TiO2或IMAC富集），以及数据处理软件（如MaxQuant/Proteome Discoverer）的参数设置技巧。 2. 蛋白质-蛋白质相互作用（PPI）的验证：除了传统的酵母双杂交（Y2H）筛选，本书重点介绍了生物分子互作测量（Bio-Layer Interferometry, BLI）和表面等离子共振（SPR）技术在动力学参数测定中的应用，以及体内（in vivo）的邻近诱导实验（Proximity Ligation Assay, PLA）。 3. 蛋白质翻译后修饰（PTM）的鉴定：详细描述了泛素化、糖基化和乙酰化的位点鉴定技术，特别强调了多维色谱分离在复杂混合物分析中的作用。第四部分：活细胞成像与实时动态监测本部分专注于突破传统固定样本分析的限制，实现对细胞内过程的实时、高分辨率观察。 1. 荧光蛋白标记与谱系示踪：介绍了Cre-LoxP系统在组织特异性标记中的高级应用，以及Brainbow/Confetti等多色报告系统的构建与成像。 2. 荧光寿命成像显微镜（FLIM）与FRET：详细阐述了FRET（Förster共振能量转移）原理在检测蛋白质-蛋白质或蛋白质-核酸相互作用中的应用，并提供了FLIM-FRET实验的校准与数据拟合方法。 3. 共聚焦与延时成像优化：针对延时成像（Time-lapse Imaging）中光毒性、光漂白和样本失水问题，提供了培养皿级的环境控制优化方案，以及多光子显微镜在深层组织成像中的优势分析。第五部分：核酸与基因调控的体外重建本部分侧重于构建高度还原性的体外系统，用于研究复杂的核酸代谢和调控事件。 1. 高效体外转录（IVT）系统：提供了从cDNA模板制备到纯化、帽修饰（Cap Addition）的高效IVT协议，用于制备高质量的mRNA用于体外翻译或疫苗开发。 2. 体外转录系统（IVS）的构建：详细介绍了基于核提取物或重组蛋白构建的无细胞翻译体系（Cell-Free System），及其在快速筛选转录因子活性和RNA结合蛋白（RBP）中的应用。 --- 目标读者与价值体现本书不是入门教科书，而是“进阶工具箱”。它适用于具有扎实分子生物学基础，渴望将研究推向更精细、更动态层面的科研工作者。通过提供详细的试剂配方、操作步骤的“陷阱”提示（Troubleshooting），以及关键步骤的理论背景，本书旨在显著提高复杂实验的成功率，加速前沿生物学发现的进程。掌握本书中的技术，意味着能够独立驾驭当前生命科学领域中最尖端的实验平台。 ---