PCR/RT-PCR In-situ pdf epub mobi txt 电子书下载 2026

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出版者:CRC Pr I Llc

作者:Morel, Gerard/ Raccurt, Mireille

出品人:

页数:432

译者:

出版时间:2002-9

价格:$ 225.94

装帧:HRD

isbn号码:9780849300417

丛书系列:

图书标签:

PCR
RT-PCR
原位杂交
分子生物学
生物技术
医学
实验技术
诊断
基因表达
细胞生物学

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具体描述

Although the polymerase chain reaction has revolutionized genetic analysis by amplifying rare nucleic acid sequences, the in situ application is the only method that allows the localization of amplified signal within tissue structure. The applications of in situ polymerase chain reaction have greatly enhanced the field of investigation in many disciplines, including viral infections, gene modification, tumor diagnosis, gene therapy, and cellular distribution of rare mRNA copies. PCR/RT-PCR in situ: Light and Electron Microscopy covers methods of in situ polymerase chain reaction (PCR) and reverse transcription PCR (RT-PCR), two new approaches in visualizing very low amounts of DNA and RNA in tissues and cell cultures at the light and electron microscopy levels. Written by experts in this field, the book provides theoretical consideration, as well as practical approaches to in situ PCR. The authors provide detailed protocols for each step, including the preparation of tissue samples, the rationale for the design of primers and revelation. They also emphasize the need for appropriate controls to meet the requirements of in situ PCR and RT-PCR specificity. Organized in a user-friendly two-column format, this book will provide you with tools necessary to perform and optimize these sensitive and powerful techniques in your research protocols.

好的，这是一本关于现代分子生物学技术与应用的综合性专业书籍的简介，完全不涉及PCR/RT-PCR In-situ 的任何技术细节或内容。 --- 现代分子生物学技术与应用：从基础原理到前沿实践图书定位：本书旨在为分子生物学、生物化学、细胞生物学、生物工程、医学检验及相关交叉学科的科研人员、研究生及高年级本科生提供一个全面、深入且侧重于非核酸扩增与分析技术的实践指导与理论参考。全书力求展现现代生物学研究中，除经典核酸扩增技术之外的广阔技术图景，强调蛋白质组学、代谢组学、细胞成像、生物物理分析及高通量测序技术（不涉及原位杂交/扩增技术）的最新进展。全书结构与核心内容概述：本书共分为六大部分，系统地涵盖了当前生物科学研究中不可或缺的关键技术平台，着重于从样本制备、组学分析、功能验证到高级成像的完整流程。第一部分：生物大分子分离、纯化与表征技术本部分深入探讨了生物大分子，特别是蛋白质和脂质的精确分离与纯化策略，为后续的结构解析和功能分析打下坚实基础。 1. 蛋白质分离与纯化策略：详细介绍了基于不同理化性质的层析技术，包括离子交换层析（IEX）、疏水层析（HIC）、凝胶过滤层析（SEC）的理论基础、设备操作要点及优化参数。特别关注亲和层析（Affinity Chromatography）中配体选择与洗脱条件的精细调控，以及在纯化过程中避免蛋白变性的策略。 2. 膜蛋白的分离与稳定化：针对研究的难点——膜蛋白，本书详细阐述了去污剂（Detergents）的选择、筛选与浓度优化，以及新型脂质纳米盘（Lipid Nanodiscs）和表面活性剂（Amphipols）在维持蛋白天然构象中的应用。 3. 质谱前处理技术：重点介绍用于肽段分析的化学和酶法消化技术，如胰酶（Trypsin）、天冬肽酶（AspN）等酶的选择标准，以及固相萃取（SPE）在提高质谱信号纯净度中的作用。第二部分：蛋白质组学与结构生物学核心技术本部分聚焦于系统层面的蛋白质组分析以及高分辨率的结构解析方法，是理解生命活动分子基础的关键。 1. 定量蛋白质组学方法：详尽阐述了基于稳定同位素标记的定量技术，包括代谢标记（如SILAC）和标记试剂（如TMT、iTRAQ）在绝对和相对定量中的差异、优缺点及数据解析流程。同时，也涵盖了非标记定量方法（如Label-Free Quantitation）的统计学考量。 2. 蛋白质相互作用组研究：系统介绍了酵母双杂交（Yeast Two-Hybrid, Y2H）的原理、优势与局限性。在体外（In Vitro）方面，重点讲解了表面等离子共振（SPR）和生物层干涉测量（BLI）技术在动力学常数（如K_D, k_on, k_off）精确测定中的应用。 3. X射线晶体学与冷冻电镜（Cryo-EM）：结构生物学部分深入讲解了蛋白质晶体生长条件的筛选艺术，数据收集（衍射数据处理）和相位解决（Molecular Replacement, MAD/SAD）的流程。对于Cryo-EM，本书详述了样品制备（冷冻、支撑膜选择）、数据采集的图像处理流程，以及三维重建的关键步骤。第三部分：细胞生物学与功能分析的先进手段本部分侧重于在活细胞或组织环境中观察生物学过程，以及对细胞功能进行精确调控的技术。 1. 荧光成像与共聚焦显微技术：详细解析了荧光染料、量子点、以及荧光蛋白（GFP及其衍生体）的特性与应用。重点介绍了共聚焦显微镜（Confocal Microscopy）的光学切片原理、多光子显微镜在深层组织成像中的优势，以及荧光寿命成像（FLIM）在环境敏感性探究中的应用。 2. 超分辨率显微技术（Super-Resolution Microscopy）：深入讲解了STED、PALM/STORM等超分辨率技术的成像原理、光物理基础以及如何克服实验中的漂移和光漂白问题，以实现纳米尺度的结构解析。 3. 细胞示踪与功能探针：介绍了一系列用于监测细胞内离子（如Ca²⁺, pH）和活性氧物种（ROS）的荧光探针的设计原理和使用规范。此外，还包括如何利用光遗传学（Optogenetics）技术通过光照精确控制特定细胞群的神经活动或细胞内通路。第四部分：代谢组学与生物信息学基础本部分转向宏观和系统水平的分析，聚焦于代谢产物的全面分析以及复杂实验数据的处理。 1. 代谢物分离与分析：重点介绍气相色谱-质谱联用（GC-MS）和液相色谱-质谱联用（LC-MS）在代谢物谱分析中的应用。讨论了样品提取（非极性与极性代谢物）的标准化流程，以及如何利用高分辨质谱技术进行从头鉴定（De Novo Identification）。 2. 生物信息学数据处理流程：本书提供了代谢组学和蛋白质组学原始数据（如原始质谱文件）到可解释生物学信息的转化指南。涵盖了谱库匹配算法、统计差异分析（如PCA、PLS-DA）的基础概念，以及通路富集分析（Pathway Enrichment Analysis）的软件工具选择。第五部分：生物制剂的生产与质量控制本部分面向生物制药和生物工程领域，讲解了细胞培养、重组蛋白生产及生物制剂质量评估的关键技术。 1. 哺乳动物细胞与微生物大规模培养技术：详细对比了批次培养、补料分批培养和连续灌流培养在不同生产目标下的适用性。重点讨论了生物反应器（Bioreactor）的设计原理、氧传递效率（OTR）的调控以及污染控制策略。 2. 重组蛋白表达系统的优化：探讨了真核细胞（如CHO细胞）和原核细胞（如大肠杆菌）表达系统的构建、启动子选择、密码子优化策略，以及如何通过诱导时机控制来提高目标蛋白的溶解性和表达量。 3. 生物活性与纯度检测：本书详细介绍了用于评估重组蛋白功效的体外（In Vitro）功能测定方法，如酶活性测定、受体结合实验。质量控制部分，侧重于高效液相色谱（HPLC）及其衍生技术（如SEC-MALS）在分子量分布、聚集体和片段分析中的应用。第六部分：免疫学与抗体工程本部分专注于研究免疫系统反应和设计新型生物治疗剂的技术。 1. 体外免疫学分析技术：详尽介绍了流式细胞术（Flow Cytometry）的多参数分析原理，包括荧光补偿、门控策略的建立。对ELISA（酶联免疫吸附测定）的间接法、夹心法和竞争法的操作规范及灵敏度优化进行了深入讨论。 2. 抗体生产与工程化：涵盖了单克隆抗体的制备技术（杂交瘤技术基础）。重点阐述了亲和成熟（Affinity Maturation）、人源化（Humanization）技术，以及双特异性抗体（BsAb）的设计与表达策略。 --- 本书的独特价值：本书的编写严格遵循“重原理、精操作、拓前沿”的原则。它避免了对某一单一、受限技术路线的过度聚焦，转而构建一个涵盖蛋白质组学、结构解析、活细胞成像和大规模生产的广谱技术框架。通过详尽的实验流程图和常见问题（Troubleshooting）分析，读者将能够掌握独立设计和执行复杂生物学实验的能力，确保研究成果的可重复性与高标准。本书是对现代生物学研究工具箱的一次全面、深入的整理与介绍。