Methods in Enzymology, Volume 419 pdf epub mobi txt 电子书下载 2026

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出版者:Academic Pr

作者:Irina Klimanskaya

出品人:

页数:576

译者:

出版时间:2006-12

价格:175

装帧:HRD

isbn号码:9780123736505

丛书系列:

图书标签:

Enzymology
Biochemistry
Molecular Biology
Protein Chemistry
Enzyme Assays
Experimental Methods
Biological Research
Laboratory Techniques
Life Sciences
Biotechnology

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This is the second of three planned volumes in the Methods in Enzymology series on the topic of stem cells. This volume is a unique anthology of stem cell techniques focusing on adult stem cells, and written by experts from the top laboratories in the world. The contributors not only have hands-on experience in the field but often have developed the original approaches that they share with great attention to detail. The chapters provide a brief review of each field followed by a "cookbook" and handy illustrations. The collection of protocols includes the isolation and maintenance of stem cells from various species using "conventional" and novel methods, such as derivation of ES cells from single blastomeres, differentiation of stem cells into specific tissue types, isolation and maintenance of somatic stem cells, stem cell-specific techniques and approaches to tissue engineering using stem cell derivatives. The reader will find that some of the topics are covered by more than one group of authors and complement each other. Comprehensive step-by-step protocols and informative illustrations can be easily followed by even the least experienced researchers in the field, and allow the setup and troubleshooting of these state-of-the-art technologies in other laboratories.

* Provides complete coverage spanning from derivation/isolation of stem cells, and including differentiation protocols, characterization and maintenance of derivatives and tissue engineering * Presents the latest most innovative technologies * Addresses therapeutic relevance including FDA compliance and tissue engineering

生物化学与分子生物学前沿探索：经典方法与新兴技术集成书名：现代酶学研究：从基础到应用作者/编者： [此处留空，或填写虚拟作者群，例如：全球生物化学家联盟] 出版社： [此处留空，或填写虚拟出版社，例如：前沿科学出版社] 出版年份： 2024年（假设）页码：约850页 --- 简介：跨越经典与创新的酶学研究全景图《现代酶学研究：从基础到应用》是一部全面、深入且高度实用的学术专著，旨在为生命科学领域的研究人员、高级学生以及工业界的研发人员提供一套整合了酶学研究的经典核心技术与最新前沿方法的综合指南。本书的结构设计旨在清晰地勾勒出当前酶学领域的研究脉络，强调从分子机制的解析到生物催化实际应用的转化路径。本书的核心关注点在于酶的功能、结构、动力学以及调控机制的阐释，同时大量篇幅致力于新型酶的发现、定向进化、结构解析和高通量筛选技术的详尽介绍。我们避免了对特定单一卷册（如Methods in Enzymology, Volume 419）内容的重复或直接引用，而是致力于构建一个更宏大、更具前瞻性的知识体系。第一部分：酶学研究的基础与经典策略本部分奠定了酶学研究的基石，系统回顾了自20世纪以来发展起来的、至今仍是实验室“金标准”的分析技术。第一章：酶的初步分离、纯化与定性分析本章详述了从复杂生物基质（如微生物培养物、组织匀浆）中获得高纯度酶制剂的完整流程。重点解析了亲和层析、离子交换层析和分子筛层析的优化参数，并讨论了酶活性的初步检测方法（如基于底物消耗或产物生成的比色法和荧光法）。此外，我们深入探讨了酶谱分析在初步鉴定混合酶组中的应用及其局限性。第二章：酶动力学的精确测定与机制推断这是酶学研究的核心。本章详细介绍了米氏方程的理论基础及其在不同反应条件下的应用。重点讲解了瞬态动力学（如快速酶反应的监测技术）和稳态动力学的精确数据采集与拟合方法。内容涵盖了双底物反应、可逆反应、以及复杂酶催化循环的动力学建模，包括对速率限制步骤的精准定位。章节末尾阐述了抑制剂动力学的经典分析范式，如竞争性、非竞争性、混合型抑制的图形分析（Lineweaver-Burk、Hanes-Woolf图）及其在药物设计中的指导意义。第三章：酶的空间结构解析：从宏观到原子级别结构决定功能。本章聚焦于X射线晶体学、冷冻电镜（Cryo-EM）和核磁共振（NMR）在酶结构解析中的应用。我们详细描述了高质量晶体/样品制备的“艺术与科学”，包括蛋白质晶体的筛选、衍射数据的采集与处理流程，以及从电子密度图解析三维结构的计算步骤。特别关注了如何通过结构信息推断活性位点的构象变化和底物/辅因子结合的分子模型。第二部分：酶的功能探索与调控网络本部分将视角从单个酶扩展到其在细胞环境中的真实行为及其复杂的调控方式。第四章：酶活性的环境敏感性与体内外环境模拟酶活性受pH、温度、离子强度、剪切力和表面张力等多种因素影响。本章系统性地展示了热稳定性分析（DSC/TGA）和高压研究在评估酶的鲁棒性方面的作用。同时，探讨了膜结合酶和固载化酶的活性测量标准，以及如何使用微流控芯片技术模拟生理微环境，实现对酶活性的更真实评估。第五章：翻译后修饰（PTMs）与酶的动态调控现代酶学研究已进入后基因组时代，PTMs被认为是理解酶活性开关的关键。本章聚焦于磷酸化、泛素化、糖基化和乙酰化等主要修饰的识别和定量分析。详述了高分辨质谱（MS/MS）在PTM位点定位中的最新进展，以及如何结合生物化学方法（如磷酸化模拟突变体）来阐断修饰对酶催化效率和底物选择性的具体影响。第六章：酶的相互作用组学：偶联与复合体的解析许多酶并非孤立工作，而是作为多酶复合物的一部分。本章介绍了用于研究蛋白质-蛋白质相互作用（PPIs）的经典方法，如酵母双杂交（Y2H）和Co-免疫沉淀（Co-IP）。此外，还引入了表面等离子体共振（SPR）和生物层干涉技术（BLI），用于实时监测酶与其底物、抑制剂或结构伴侣的结合/解离动力学常数（$k_{on}$和$k_{off}$）。第三部分：酶工程、定向进化与应用潜力本部分侧重于如何利用酶学知识进行分子设计和工业应用。第七章：理性设计与酶的定向进化策略本章深入探讨了如何基于已知的酶催化机制和结构信息，通过定点突变来优化酶的活性、稳定性和底物特异性。重点详细解析了DNA重组技术在构建突变文库中的应用。在定向进化方面，详细介绍了错误倾向PCR（Error-Prone PCR）、DNA Shuffling（DNA重组）等无导向进化的核心流程，以及如何与高通量筛选系统（如微滴数字PCR或平板筛选）结合，加速所需性状的筛选。第八章：生物催化与绿色化学的应用实现酶作为高效、专一的生物催化剂，在精细化工和制药工业中潜力巨大。本章聚焦于非天然底物的催化。内容包括全细胞催化、酶的固定化技术（共价偶联、吸附、包埋），以及如何通过固定化提高酶的回收率和在有机溶剂中的稳定性。还讨论了酶法合成手性药物的案例分析，强调了立体选择性控制在工业放大过程中的重要性。第九章：新兴酶学工具：单分子技术与计算预测展望未来，本章介绍了最尖端的工具。单分子荧光光谱技术（如FRET/SmFRET）如何揭示单个酶分子的异质性和动态构象转换，提供超越群体平均信息的深刻见解。同时，详细介绍了分子动力学（MD）模拟和量子化学计算（QM/MM）在预测过渡态能量、模拟酶促反应机理方面的强大能力，这些计算工具正日益成为指导实验设计的关键驱动力。 --- 读者对象：生物化学、生物技术、药物化学、生物工程等领域的研究生、博士后、高校教师以及工业界的研发工程师。本书特色： 1. 技术集成性强：覆盖了从传统的生化分析到最先进的结构生物学和计算模拟的全光谱技术。 2. 实用性导向：每一技术章节均提供了详细的操作步骤、关键参数的优化建议以及常见问题的故障排除指南。 3. 跨学科视野：强调酶学原理在药物开发、生物能源和材料科学中的转化应用。通过阅读《现代酶学研究：从基础到应用》，读者将能够系统地掌握现代酶学研究的全部工具箱，并具备设计和执行高水准酶学实验的扎实能力。