临床血液学检验实验指导

临床血液学检验实验指导 pdf epub mobi txt 电子书 下载 2026

出版者:
作者:夏薇 编
出品人:
页数:185
译者:
出版时间:2010-3
价格:28.00元
装帧:
isbn号码:9787506745734
丛书系列:
图书标签:
  • 临床血液学
  • 血液检验
  • 实验指导
  • 医学检验
  • 检验医学
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  • 诊断学
  • 临床医学
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具体描述

《全国高等医药院校医学检验专业规划教材•临床血液学检验实验指导》分4章,共60个实验。分别介绍了血细胞形态学检查基本方法和技术、红细胞疾病检验、白细胞疾病检验和血栓与止血障碍性疾病检验的基本方法。重点讨论了各实验的目的、原理、材料、方法、注意事项、参考范围、临床应用及评价等内容。

《现代生命科学研究方法与技术》 本书旨在为从事生命科学相关领域研究的科研人员、研究生及高年级本科生提供一套全面、系统且实用的实验指导。本书内容涵盖了生命科学研究中最常用、最核心的几大类实验技术,并着重于其原理、操作细节、结果解读及在具体研究中的应用。 一、分子生物学技术 本部分将深入浅出地介绍分子生物学领域的基础与前沿技术。 核酸提取与纯化: 详细阐述了从不同类型样本(如血液、组织、细胞、微生物)中提取DNA和RNA的各种方法,包括酚-氯仿法、硅胶膜吸附法、磁珠法等,重点介绍各种方法的优缺点、适用范围及优化技巧。针对RNA提取,特别强调了 RNase 抑制和降解产物避免的关键步骤。 PCR及其衍生技术: 全面覆盖了标准PCR、实时荧光定量PCR (qRT-PCR)、反转录PCR (RT-PCR)、巢式PCR、多重PCR等技术。详细讲解了引物设计原则、反应体系优化、模板选择、扩增条件设定等关键要素,并深入讨论了SYBR Green和TaqMan探针法在qRT-PCR中的应用差异与选择。此外,还将介绍PCR产物的胶回收、克隆及测序等后续处理。 基因克隆与表达: 详细介绍基因的克隆策略,包括限制性内切酶消化-连接法、TA克隆、Gibson组装、Gateway克隆系统等。对载体选择(质粒、病毒载体、酵母人工染色体等)、转化/转染方法(化学法、电穿孔法、病毒转导法)进行了详尽的阐述。在此基础上,将讲解如何构建真核细胞或原核细胞表达系统,以及外源蛋白的表达、纯化与鉴定。 基因编辑技术: 重点介绍CRISPR-Cas9基因编辑系统的原理、设计指南(sgRNA设计)、递送方法(共转染、病毒递送)以及编辑效率的评估。将结合实例介绍其在基因敲除、敲入、碱基编辑等方面的应用。 核酸印迹技术(Southern, Northern): 尽管使用频率相对较低,但为理解基因结构、基因表达调控提供基础,仍有其重要价值。本书将介绍这两种技术的原理、步骤、灵敏度优化及在特定研究中的应用场景。 二、蛋白质组学与蛋白质分析技术 本部分聚焦于蛋白质的研究,从提取到功能分析。 蛋白质提取与溶解: 讨论了从不同细胞类型和组织中提取总蛋白的策略,包括细胞裂解液的选择(RIPA、NP-40等)、蛋白酶抑制剂和磷酸酶抑制剂的应用。强调了溶解度问题和蛋白降解的预防。 SDS-PAGE与Western Blotting: 详细讲解SDS-PAGE的原理、凝胶制备、样品处理、电泳参数优化以及常用染色方法(考马斯亮蓝、银染)。在此基础上,深入阐述Western Blotting的完整流程,包括转膜(湿转、半干转、干转)、封闭、一抗二抗孵育、显色(ECL、碱性磷酸酶显色)以及结果的定量分析与解读。重点关注信号干扰、非特异性结合的排除。 酶联免疫吸附测定 (ELISA): 介绍ELISA的各种形式(双抗体夹心法、间接法、竞争法),详细讲解包被、封闭、孵育、洗涤、显色和定量分析的步骤,以及在蛋白定量、抗体检测、细胞因子分析等方面的广泛应用。 蛋白质纯化技术: 介绍基于不同理化性质的蛋白纯化方法,包括亲和层析、离子交换层析、疏水层析、尺寸排阻层析等。阐述层析柱的选择、缓冲液的配制、梯度洗脱的优化以及纯化效率的评估。 质谱技术简介: 简要介绍质谱在蛋白质组学研究中的应用,包括鉴定未知蛋白、定量蛋白表达、翻译后修饰分析等,并提及常用的制样和数据分析方法。 三、细胞生物学实验技术 本部分涵盖了细胞培养、计数、观察及功能分析等核心技术。 细胞培养与传代: 详细介绍无菌操作技术、培养基的选择与配制(DMEM, RPMI-1640, F12等)、培养基添加物(血清、氨基酸、生长因子)、细胞株的选择、细胞冻存与复苏。重点讲解细胞生长状态的评估与培养环境(CO2浓度、温度、湿度)的控制。 细胞计数与活性检测: 介绍血细胞计数板法、自动细胞计数仪、台盼蓝拒染法等细胞计数方法。阐述MTT、CCK-8、alamarBlue等基于代谢活性的细胞增殖与毒性检测方法。 细胞成像技术: 重点介绍光学显微镜(明场、相差、荧光)的操作与维护。详细讲解细胞固定、透化、染色(DAPI, PI, Phalloidin, 抗体免疫荧光染色)的流程,以及共聚焦显微镜在细胞三维成像和亚细胞结构观察中的应用。 流式细胞术: 介绍流式细胞术的基本原理,包括细胞前向角散(FSC)、侧向角散(SSC)信号的解读,以及荧光标记在细胞表面标志物检测、细胞周期分析、细胞凋亡检测(Annexin V/PI)、细胞分选等方面的应用。 细胞凋亡与自噬检测: 详细介绍Annexin V/PI双染法、TUNEL法、caspase活性检测、Western Blot检测凋亡相关蛋白(如Bcl-2家族、Caspase-3)等方法。讲解自噬标记蛋白(LC3、p62)的Western Blot检测和自噬流指示剂(如GFP-LC3)的荧光显微镜观察。 四、生物信息学基础与数据分析 本部分为实验结果的解读提供工具与思路。 常用数据库介绍: 介绍NCBI(GenBank, PubMed, BLAST)、UniProt、Ensembl等核心生物学数据库,并讲解其查询和数据获取方法。 序列比对与分析: 详解BLAST家族算法在DNA和蛋白质序列相似性搜索中的应用,介绍多序列比对工具(Clustal Omega, MAFFT)及其在进化分析中的作用。 基因表达数据分析入门: 简要介绍GEO、ArrayExpress等公共基因表达数据库,以及RNA-Seq数据分析的基本流程(比对、定量、差异表达分析)。 蛋白质结构预测与可视化: 介绍PyMOL、Chimera等分子可视化软件,以及AlphaFold等预测工具的基本概念。 本书强调理论与实践相结合,每章在介绍完基本原理后,都会提供详细的实验操作步骤、注意事项、结果判读的关键点以及常见的错误分析与排除方法。此外,书中还将穿插介绍一些经典的实验案例,帮助读者更好地理解技术在解决实际科学问题中的作用。本书力求语言准确、表述清晰,避免晦涩难懂的专业术语,旨在成为生命科学研究人员案头的必备参考书。

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