RNA Purification and Analysis pdf epub mobi txt 电子书下载 2026

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出版者:

作者:Gjerde, Douglas T./ Hoang, Lee/ Hornby, David

出品人:

页数:206

译者:

出版时间:2009-9

价格:1178.00元

装帧:

isbn号码:9783527321162

丛书系列:

图书标签:

RNA
RNA purification
RNA analysis
Molecular biology
Biochemistry
Laboratory techniques
Genomics
Transcriptomics
Nucleic acids
Protocols

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具体描述

This first book on the market covers the many new and important RNA species discovered over the past five years, explaining current methods for the enrichment, separation and purification of these novel RNAs.

Building up from general principles of RNA biochemistry and biophysics, this book addresses the practical aspects relevant to the laboratory researcher throughout, while discussing the performance and potential problems of the methods discussed. An appendix contains a glossary with the important terms and techniques used in RNA analysis.

By explaining the basic and working principles of the methods, the book allows biochemists and molecular biologists to gain much more expertise than by simply repeating a pre-formulated protocol, enabling them to select the procedure and materials best suited to the RNA analysis task at hand. As a result, they will be able to develop new protocols where needed and optimize and fine-tune the general purpose standard protocols that come with the purification equipment and instrumentation.

《细胞与分子生物学实验指南》本书是一本面向生物学研究者和高等院校学生的实验手册，旨在系统性地介绍细胞与分子生物学领域最常用、最核心的实验技术。内容涵盖从基础的细胞培养、微生物操作，到复杂的基因克隆、蛋白质表达与分析，再到基因组学、转录组学、蛋白质组学等前沿技术的研究方法。本书不仅提供了详细的实验步骤、试剂配比和仪器操作说明，更深入地阐述了每项技术背后的原理、关键步骤的注意事项、结果的判读依据以及潜在的干扰因素和优化策略，帮助读者理解“为什么这么做”以及“如何做得更好”。第一部分：基础实验技术细胞培养与无菌操作：详细介绍各种细胞系的培养基配制、细胞传代、冻存与复苏技术，以及在生物安全柜内的无菌操作规范。涵盖真核细胞、原核细胞和真菌的培养方法，以及细胞培养中的常见问题诊断与排除。微生物操作：教授细菌、酵母等微生物的培养、菌种保藏、平板划线、液体培养等技术，以及无菌操作在微生物学研究中的重要性。溶液配制与缓冲体系：介绍常用缓冲液的配制原则、pH 调节方法，以及不同pH 值对生物分子稳定性和反应效率的影响。讲解质量浓度、摩尔浓度的计算与换算。移液与容量分析：强调精确移液的重要性，介绍不同规格移液器（微量、定量）的使用技巧，以及容量瓶、刻度吸管等容量器具的正确使用方法。第二部分：核酸研究技术 DNA 提取与纯化：详述从不同来源（血液、组织、细胞、植物、微生物）提取基因组 DNA 的多种方法，包括酚-氯仿抽提法、硅胶柱吸附法、磁珠法等。重点讲解影响 DNA 纯度和得率的因素，以及 DNA 质量和浓度的检测方法（如琼脂糖凝胶电泳、紫外分光光度法）。 RNA 提取与纯化：涵盖从动物组织、植物、细菌等不同样本中提取总 RNA 的流程，包括裂解、有机溶剂抽提、蛋白酶 K 消化、RNase 抑制剂的使用等。强调 RNase 的严格控制，并介绍 RNA 质量检测（如电泳、NanoDrop、Bioanalyzer）。 DNA 和 RNA 的定量与质检：详细介绍紫外分光光度法（NanoDrop）和荧光定量法（Qubit）在 DNA 和 RNA 定量中的应用与区别。讲解琼脂糖凝胶电泳在检测核酸完整性、大小和污染方面的作用。 PCR 技术详解：介绍 PCR 的基本原理、热循环仪的操作、引物设计原则、反应体系优化。涵盖标准 PCR、RT-PCR、qPCR（实时荧光定量 PCR）等技术，以及它们在基因检测、定量分析中的应用。 DNA 扩增产物的琼脂糖凝胶电泳分析：讲解如何配制不同浓度梯度的琼脂糖凝胶，如何选择合适的 DNA 染料（如 EB、SYBR Green），以及如何通过电泳分离和分析 DNA 片段。限制性内切酶消化与分子克隆：介绍限制性内切酶的类型、作用机制，以及酶切反应的条件。详细讲解连接酶的作用，并指导读者完成简单的基因亚克隆、重组和载体构建。 DNA 测序技术：概述 Sanger 测序和高通量测序（NGS）的基本原理、流程及应用，重点介绍测序结果的分析与解读。核酸分子杂交技术：介绍 Southern Blot、Northern Blot 的原理、步骤、信号检测方法，以及它们在基因检测、基因表达水平研究中的应用。核酸电泳技术：除了琼脂糖凝胶电泳，还介绍聚丙烯酰胺凝胶电泳（PAGE）在分离小分子 DNA/RNA 和蛋白质中的应用。第三部分：蛋白质研究技术蛋白质提取与溶解：介绍从不同细胞和组织中提取蛋白质的常用方法，包括细胞裂解液的选择、匀浆、超声等技术，以及影响蛋白质提取效率的因素。蛋白质定量：详细介绍 Bradford 法、BCA 法、 Lowry 法等常用蛋白质定量方法的原理、操作步骤、优缺点以及适用范围。 SDS-PAGE 凝胶电泳：讲解 SDS-PAGE 的原理、凝胶配制、电泳槽搭建、样品处理、电泳过程控制，以及如何通过电泳分离蛋白质。蛋白质印迹（Western Blot）：详细介绍膜的选择（PVDF、NC）、湿转、半干转等转膜技术，抗体的选择与优化、封闭、一抗二抗孵育、显色检测（化学发光、荧光）等步骤。重点讲解结果的判读与分析。酶联免疫吸附测定（ELISA）：介绍 ELISA 的各种类型（间接法、双抗体夹心法、竞争法），操作流程，以及在定量检测蛋白质、抗体等生物分子中的应用。蛋白质纯化技术：简要介绍亲和层析、离子交换层析、疏水层析等常用蛋白质纯化方法的原理与应用。质谱分析在蛋白质组学中的应用：概述质谱技术在鉴定蛋白质、研究蛋白质翻译后修饰等方面的基础知识。第四部分：细胞生物学与信号转导研究细胞凋亡检测：介绍 Annexin V-FITC/PI 染色、TUNEL 法、Caspase 活性检测等常用细胞凋亡检测方法的原理与操作。细胞周期检测：讲解 PI 染色法结合流式细胞术检测细胞周期的原理与步骤。细胞信号通路研究：介绍利用 Western Blot、ELISA、免疫荧光等技术检测信号通路关键蛋白的磷酸化状态，以及激酶抑制剂、激动剂的应用。细胞成像技术：介绍荧光显微镜、共聚焦显微镜的基本原理，以及免疫荧光染色、GFP 标记等在观察细胞内物质定位、动态变化中的应用。流式细胞术：介绍流式细胞仪的基本原理，细胞表面标志物、胞内物质的染色方法，以及其在细胞计数、分选、活性分析中的应用。第五部分：生物信息学基础与数据分析数据库查询：介绍 GenBank、Ensembl、UniProt 等常用生物数据库的使用方法，如何查询基因、蛋白质序列信息。序列比对：讲解 BLAST 等序列比对工具的基本原理和操作，如何评估序列同源性。基因组学与转录组学数据分析入门：简要介绍基因组比对、基因注释、差异基因表达分析的基本概念。文献查阅与管理：指导读者如何高效地检索和管理科研文献。本书注重实验的可重复性和结果的可靠性，旨在为读者提供一套全面、实用、易于上手的实验操作指南，帮助他们在细胞与分子生物学研究的道路上稳步前进。