Protocols for Nucleic Acid Analysis by Nonradioactive Probes pdf epub mobi txt 电子书 下载 2026

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出版者:Humana Pr Inc

作者:Hilario, Elena (EDT)/ MacKay, John (EDT)

出品人:

页数:321

译者:

出版时间:2007-5

价格:$ 145.77

装帧:HRD

isbn号码:9781588294302

丛书系列:

图书标签:

• 核酸分析
• 非放射性探针
• 分子生物学
• 生物化学
• DNA
• RNA
• PCR
• 杂交
• 生物技术
• 实验方案

好的，以下是一本关于非放射性探针核酸分析的图书简介，完全不包含《Protocols for Nucleic Acid Analysis by Nonradioactive Probes》的内容： --- 书名：分子生物学前沿技术：基于荧光标记和高通量测序的基因组学研究实践 作者：[此处可填写作者姓名，例如：张宏伟、李明远] 出版社：[此处可填写出版社名称，例如：科学出版社] 出版年份：2024年 图书简介 在现代生命科学研究中，对核酸的精确、高灵敏度分析是理解生命过程、诊断疾病和开发新疗法的基石。《分子生物学前沿技术：基于荧光标记和高通量测序的基因组学研究实践》一书，旨在系统梳理和深入探讨当前分子生物学领域中最具影响力、且不依赖放射性同位素的先进分析技术。本书聚焦于如何利用新型荧光探针、实时监测系统以及新一代测序（NGS）平台，实现对DNA、RNA及其相关分子事件的动态、高分辨率研究。 本书不仅是一本技术手册，更是一部指导研究人员如何从实验设计到数据解读的综合指南。全书结构严谨，内容紧密结合当前生物医学研究的热点和挑战，分为四大核心部分，层层递进地介绍了从基础原理到复杂应用的完整流程。 --- 第一部分：荧光标记技术与实时定量分析（qPCR/RT-qPCR） 本部分全面介绍了现代分子诊断和基础研究中不可或缺的荧光定量技术。我们摒弃了传统的基于标记物半衰期的检测方法，转而深入探讨了基于有机染料和量子点等新型荧光团的标记策略。 核心内容概述： 1. 荧光探针的化学基础与设计原理： 详细阐述了 TaqMan 探针、分子信标（Molecular Beacons）以及循环构象敏感探针（ConfoMaxx Probes）的结构特点、激发/发射光谱特性及其在特定核酸序列识别中的优势与局限。重点分析了 FRET（Förster 共振能量转移）原理在探针激活机制中的应用。 2. 实时荧光定量PCR（qPCR）的优化与验证： 深入讲解了如何根据不同样本（如FFPE组织、cfDNA或细胞培养物）选择合适的提取和纯化方案，以确保下游PCR反应的效率。讨论了Ct值的标准曲线建立、内参基因的选择与验证，以及如何运用溶解曲线分析来排除非特异性扩增。 3. 高分辨率熔解曲线分析（HRM）： HRM作为一种快速、低成本的突变检测和基因分型方法，在本章中得到了详尽的介绍。我们展示了如何通过精确控制升温速率和采集高精度荧光数据，来区分单碱基多态性（SNP）和微小插入/缺失突变。 4. RNA定量策略：从总RNA到单细胞水平： 涵盖了基于逆转录（RT）的定量策略，包括一步法和两步法反应体系的比较。特别关注了近年来新兴的单细胞RNA测序（scRNA-seq）的前处理技术，阐述了如何在高通量筛选中维持RNA的完整性和特异性标记。 --- 第二部分：高通量测序（NGS）的数据驱动型应用 本部分聚焦于新一代测序技术如何彻底改变我们对基因组、转录组和表观遗传组的理解。内容侧重于样本制备与文库构建中对非放射性标记的应用，以及后续的生物信息学分析流程。 核心内容概述： 1. NGS文库制备中的关键步骤： 详细剖析了基于适配子连接的文库构建流程，重点阐述了如何利用PCR扩增来引入索引序列（Index Barcodes），实现多重样本的混合上机（Multiplexing）。这完全依赖于精确设计的、不含放射性同位素的引物。 2. 全基因组测序（WGS）与外显子组测序（WES）： 介绍了靶向富集策略的原理，包括使用合成的生物素化或荧光标记的探针捕获目标区域，并利用磁珠分离技术实现高效纯化。讨论了捕获效率对后续变异检测精度的影响。 3. 转录组学（RNA-Seq）的深度解析： 涵盖了从mRNA Poly(A) 链捕获到去除rRNA的各种方法。重点讨论了双末端测序（Paired-End Sequencing）在组装和基因融合检测中的优势，以及如何通过分析测序深度来量化基因表达水平。 4. 表观遗传学测序技术： 详述了ChIP-Seq（染色质免疫沉淀测序）的标准操作流程，如何通过抗体捕获特定蛋白结合的DNA片段，并对其进行文库标记和测序。同时，也介绍了全亚硫酸氢盐测序（WGBS）在甲基化位点鉴定的精确流程。 --- 第三部分：先进的体内与体外成像技术 本部分探讨了荧光技术在细胞和组织水平上的可视化应用，这些技术为观察核酸动态行为提供了前所未有的窗口。 核心内容概述： 1. 荧光原位杂交（FISH）与超分辨率显微镜： 详细描述了利用寡核苷酸探针进行目标序列定位的技术。从经典的间期FISH到更精细的拉曼散射成像（Raman Imaging）在组织切片中的应用。此外，重点介绍了STED、PALM/STORM等超分辨率技术如何突破传统衍射极限，实现对染色质结构和基因表达区域的纳米级定位。 2. 细胞内探针技术与FRET成像： 阐述了如何设计能够进入活细胞的特定荧光探针，用于实时监测DNA损伤修复（DDR）过程中的蛋白招募，或跟踪特定mRNA的翻译事件。 3. 高内涵筛选（HCS）平台： 介绍了自动化高内涵成像系统如何结合荧光标记技术，对数以万计的细胞进行多参数的定量分析，特别是在药物筛选中对核酸相关表型（如细胞周期阻滞、凋亡）的自动识别和评分。 --- 第四部分：数据处理、质量控制与未来展望 本部分旨在弥合实验操作与数据解读之间的鸿沟，确保研究结果的可靠性和可重复性。 核心内容概述： 1. NGS数据基础生物信息学流程： 提供了从原始FASTQ文件开始的标准分析流程，包括序列比对（Alignment）、变异调用（Variant Calling, 如SNV/Indel）、以及差异表达分析（Differential Expression Analysis）。推荐了常用的开源工具包（如BWA, GATK, DESeq2）。 2. 质量控制（QC）与偏差评估： 强调了对文库复杂性、GC偏倚、以及测序深度不足等常见问题的识别和量化方法。讨论了如何通过统计学方法确保生物学重复间的可信度。 3. 新兴技术与平台整合： 展望了基于纳米孔测序（Nanopore Sequencing）的长读长技术在全长转录本分析中的潜力，以及空间转录组学（Spatial Transcriptomics）如何结合荧光标记，在保留组织形态信息的同时进行基因表达定量。 本书的读者对象主要面向分子生物学、遗传学、生物医学工程以及生物信息学领域的高年级本科生、研究生、博士后研究人员以及经验丰富的实验室技术人员。通过学习本书内容，读者将能够熟练掌握新一代非放射性核酸分析技术，为应对复杂的生命科学前沿挑战做好充分准备。 ---

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