具体描述
本书依据实验诊断学教学大纲要求，以《诊断学》第6版实验诊断的内容为基础，共分10章，分别对血液检查的一般检查技术、骨髓细胞学检查、止血与凝血障碍常用的实验室检查、尿液检查、肾功能检查、粪便检查、其他体液检查、临床生化检查、血气分析、临床免疫学检查等进行讲述，内容新颖，实用性强，适合高等医学院校在校生学习和临床检验医师阅读参考。
《现代分子生物学技术与应用》 内容提要 本书旨在系统、深入地介绍现代分子生物学领域的核心技术原理、实验流程、数据分析方法及其在生命科学研究、生物医药开发和临床诊断中的广泛应用。全书内容涵盖了从基础的核酸提取与纯化技术，到前沿的基因组编辑、蛋白质组学分析，以及高通量测序技术等多个维度，力求为读者构建一个全面、立体的分子生物学技术知识体系。 第一部分：分子生物学基础与核心技术 第一章：分子生物学实验室安全与规范 本章首先强调分子生物学实验操作的特殊性与潜在风险，详细阐述了生物安全等级（BSL）的划分标准、实验室的生物安全管理制度，包括个人防护装备（PPE）的正确使用、生物性废弃物的分类收集与无害化处理流程。随后，系统介绍了实验室常用设备（如超速离心机、PCR仪、凝胶电泳系统）的安全操作规程、维护保养要点，以及无菌操作技术（如超净工作台的使用）的标准化步骤，确保研究工作的科学性与安全性。 第二章：核酸的提取、纯化与定量 本章深入探讨了从不同生物样本（血液、组织、细胞、植物材料）中高效、高质量提取基因组DNA、质粒DNA和总RNA的技术。详细对比了酚氯仿抽提法、硅胶柱亲和层析法和磁珠法在效率、纯度和适用性上的差异。重点讲解了RNA提取中RNase污染的防护策略和逆转录（RT）步骤的优化。最后，阐述了核酸定量分析的原理，包括紫外分光光度法、荧光染料法（如Nanodrop和Qubit系统）的准确度评估和质量控制指标（如A260/A280）。 第三章：聚合酶链式反应（PCR）及其衍生技术 本章作为分子生物学核心技术之一，详尽阐述了标准PCR的反应体系、热循环参数设置的依据，以及引物设计的基本原则和影响因素。在此基础上，系统介绍了实时荧光定量PCR（qPCR）的原理（SYBR Green和TaqMan探针技术），并教授如何通过标准曲线法和ΔΔCt法进行绝对/相对定量分析。此外，还涵盖了连接PCR（Nested PCR）、反转录PCR（RT-PCR）在不同研究情境下的应用，以及对常见扩增失败、非特异性扩增等问题的故障排除方法。 第四章：核酸的电泳分离与分析 本章详细介绍了琼脂糖凝胶电泳和聚丙烯酰胺凝胶电泳（PAGE）分离核酸片段的物理基础和操作细节。重点阐述了如何根据片段大小选择合适的凝胶浓度、缓冲液体系，以及电泳过程中的电压控制。对于PAGE，区分了非变性和变性电泳（如Northern/Southern Blot的前期准备）的应用场景。同时，讲解了凝胶成像系统的操作、图像的采集、保存与初步分析。 第二部分：基因组与转录组研究技术 第五章：分子克隆技术与载体构建 本章全面介绍分子克隆的经典步骤，包括限制性内切酶的选择、粘性末端连接、连接酶的应用。详细对比了原核表达载体（如pET系统）、真核表达载体（如pcDNA系列）和慢病毒/腺病毒载体在宿主选择和基因调控元件上的差异。重点解析了高效的基因插入方法，如Gibson Assembly、TOPO克隆以及Gateway重组克隆系统的操作流程和优势。 第六章：基因测序技术：从Sanger到高通量测序 本章首先回顾了Sanger测序法的原理和应用。随后，重点深入讲解了新一代测序技术（NGS，或称高通量测序）的革命性进展。详细介绍了Illumina测序平台（SBS技术）的文库制备流程（片段化、接头连接、扩增），以及测序数据产生的基本格式（FASTQ）。对于数据分析的初步处理，阐述了质量控制（QC）、序列比对（Mapping）的基本概念和常用软件工具。 第七章：宏基因组学与转录组学数据分析基础 本章聚焦于NGS数据的生物信息学解读。在宏基因组学方面，介绍了物种组成分析（如16S rRNA测序）和功能基因预测的基本流程。在转录组学（RNA-Seq）方面，详细拆解了差异表达基因（DEG）的识别流程，包括Reads计数、归一化方法（如TPM, FPKM）的选择，以及差异性分析中常用统计模型（如DESeq2, edgeR）的理论基础和实际操作步骤。 第三部分：蛋白质与细胞水平的研究技术 第八章：蛋白质的提取、分离与鉴定 本章讲解了从细胞或组织中高效提取全蛋白质组或特定亚细胞组分的方法。详细描述了SDS-PAGE（十二烷基硫酸钠聚丙烯酰胺凝胶电泳）的原理和操作，这是分离蛋白质的关键步骤。重点介绍了蛋白质印迹法（Western Blotting）的免疫学原理、一抗和二抗的选择、化学发光检测的优化，以及如何通过标准品实现半定量分析。 第九章：蛋白质相互作用与功能研究 本章探讨研究蛋白质功能和相互作用网络的常用技术。系统阐述了酵母双杂交技术（Y2H）的原理、优势与局限性。详细介绍了体内共免疫沉淀（Co-IP）的实验设计、洗脱条件优化以及后续的蛋白质鉴定（如结合质谱）。此外，还介绍了荧光互补报告基因系统（FRET）在活细胞水平检测相互作用的应用。 第十章：细胞培养技术与功能分析 本章规范了哺乳动物细胞无菌培养的基本技术，包括细胞株的复苏、传代、冻存与复苏标准。详细介绍了各种细胞分析方法的应用，如细胞活力检测（MTT/CCK-8法）、细胞凋亡检测（Annexin V/PI染色流式细胞术）、细胞周期分析。同时，介绍了报告基因实验（如Dual-Luciferase Assay）在研究转录因子活性的应用。 第十一章：基因编辑技术：CRISPR/Cas9系统 本章全面介绍了革命性的CRISPR/Cas9基因编辑系统的作用机制，包括sgRNA的设计原则、Cas9核酸内切酶的递送方式（质粒、mRNA或RNP复合物）。详细讲解了如何设计和验证靶向效率，以及编辑成功率的评估方法（如T7E1酶切法、高分辨熔解曲线分析、单克隆筛选）。同时，探讨了该技术在构建基因敲除、敲入模型以及进行基础研究中的应用前景。 结语 本书的编排注重理论与实践的紧密结合，每一技术模块均辅以详尽的操作流程和关键控制点，旨在帮助读者在掌握分子生物学实验技能的同时，具备独立设计、执行和分析复杂实验项目的能力，为生命科学前沿探索提供坚实的技术支撑。
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