干细胞实验指南

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出版者:科学出版社
作者:裴雪涛
出品人:
页数:414
译者:
出版时间:2006-1
价格:68.00元
装帧:简裝本
isbn号码:9787030161932
丛书系列:
图书标签:
  • 其他
  • 干细胞
  • 细胞生物学
  • 实验技术
  • 生物医学
  • 再生医学
  • 组织工程
  • 实验室操作
  • 研究方法
  • 生命科学
  • 生物技术
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具体描述

《干细胞实验指南》以新颖、实用为基准,以可操作为目的,汇集了一批工作在第一线的年轻科学家、博士后和博士生,以其对干细胞领域新知识的敏锐和对新技术的掌握,把最新的方法及技术加以凝练,按照实验操作指南的格式,对干细胞的分离纯化、鉴定、培养、扩增、诱导分化、核移植、细胞周期与调控、保存、复苏、与组织工程结合、临床应用等技术进行系统描述,每一项技术均按基本原理、主要设备与试剂、操作步骤、结果判断、注意事项、参考文献(3-8篇)等展开,希望达到系统、科学、全面地介绍干细胞研究的主要技术和实验方法,为从事干细胞及其相关领域研究、开发和应用的同行提供一本具有可操作性的工具书和参考材料。

《干细胞实验指南》 《干细胞实验指南》是一本面向科研人员、研究生及相关领域专业人士的实践操作手册,旨在为读者提供全面、系统、详细的干细胞培养、分化、鉴定及相关分子生物学实验技术指导。本书内容严谨,逻辑清晰,覆盖了从基础理论到具体操作的各个环节,力求成为实验室必备的参考工具书。 核心内容概述: 本书分为四大核心部分,层层递进,确保读者能够循序渐进地掌握干细胞实验的各项技能。 第一部分:干细胞基础理论与分类 在正式进入实验操作之前,本书首先为读者构建坚实的理论基础。本部分详细阐述了干细胞的基本概念,包括其自我更新能力和多向分化潜能。同时,深入剖析了不同类型干细胞的特性,重点介绍了几类在研究和临床应用中最具代表性的干细胞: 胚胎干细胞(ESCs): 详细介绍其来源(如囊胚内细胞团)、生物学特性(如Oct4, Sox2, Nanog等关键转录因子的表达)、建立与维持培养的方法(如 feeder layers, conditioned medium, small molecule inhibitors 等)以及在体外诱导分化为特定细胞类型的策略。 诱导多能干细胞(iPSCs): 重点讲解iPSCs的构建技术,包括使用病毒载体(逆转录病毒、慢病毒)、非病毒载体(质粒、mRNA、Sendai virus、minicircle)以及整合素(Cre-loxP)系统等重编程方法。同时,详细阐述了iPSCs的鉴定和质量控制,包括形态学观察、免疫荧光标记、基因表达分析以及在体外分化为三胚层细胞的能力验证。 成体干细胞(ASCs): 介绍骨髓间充质干细胞(BMSCs)、造血干细胞(HSCs)、神经干细胞(NSCs)等常见成体干细胞的来源、分离纯化技术、培养条件以及它们在体内外的功能。 其他新型干细胞: 简要介绍如成体干细胞的衍生细胞(如脐带血干细胞、羊膜干细胞)、癌干细胞(CSCs)等前沿研究方向。 本部分还包含了对干细胞生物学的重要概念的解读,如细胞微环境(niche)、信号转导通路(Wnt, Notch, BMP等)在干细胞维持和分化中的作用,以及端粒酶和端粒在细胞永生化中的作用。 第二部分:干细胞培养与维持技术 这是本书的实践核心,详细介绍了各类干细胞在体外培养和维持的精细技术: 细胞分离与培养基制备: 组织取材与消化: 针对不同组织来源(如胎盘、脐带、骨髓、皮肤等),提供详细的组织取材、无菌处理、酶消化(胶原酶、胰蛋白酶、透明质酸酶等)及细胞过滤分离的步骤和注意事项。 培养基配制与优化: 详细讲解常用培养基(如DMEM, RPMI 1640, mTeSR, Essential 8 等)的配制方法,以及血清(FBS)、生长因子(EGF, FGF, LIF, SCF, TPO 等)、小分子抑制剂(Y-27632, ROCK inhibitors 等)和细胞外基质(Matrigel, Laminin, Collagen IV 等)在干细胞培养中的作用和选择标准。 无菌操作与污染防控: 强调无菌操作的重要性,提供详细的无菌技术指导,包括超净台使用、试剂灭菌、细胞传代、冻存复苏等关键环节,以及如何识别和处理常见的细胞培养污染(细菌、真菌、支原体)。 关键培养技术细节: 贴壁细胞培养: 涵盖细胞状态评估、传代技巧(消化时间、密度控制)、铺板策略、培养箱参数(温度、CO2浓度、湿度)的设定与监测。 悬浮细胞培养: 介绍用于培养部分干细胞(如HSCs)的悬浮培养技术,包括摇瓶、生物反应器等。 共培养技术: 详细介绍如何利用 feeder cells(如MSCs, MEFs)或 conditioned medium 来维持ESCs和iPSCs的未分化状态,以及共培养中关键参数的控制。 细胞冻存与复苏: 提供详细的细胞冻存方案(冻存管准备、冻存液选择、程序降温)、冻存细胞的复苏步骤及活力评估。 细胞传代与密度优化: 探讨不同类型干细胞的最佳传代次数和密度,以及如何通过细胞计数和活性分析来优化传代策略。 第三部分:干细胞鉴定与分化技术 本书重点在于提供实用的鉴定和分化技术,以验证干细胞的特性和功能: 干细胞鉴定技术: 形态学鉴定: 描述不同类型干细胞在培养过程中的典型形态特征。 免疫荧光与流式细胞术: 详细列出并解析不同类型干细胞(如ESCs/iPSCs的Pluripotency markers: Oct4, Sox2, Nanog, Tra-1-60, SSEA-4;BMSCs的MSC markers: CD73, CD90, CD105, CD45-, CD34-)的关键表面和胞内标志物,并提供免疫染色和流式细胞分析的实验方案,包括抗体选择、染色步骤、数据采集与分析。 基因表达分析: RT-qPCR: 详细介绍RNA提取、cDNA合成、引物设计、PCR反应条件优化及数据分析,用于检测特定基因的表达水平。 Western Blotting: 提供蛋白质提取、SDS-PAGE电泳、转膜、封闭、一抗二抗孵育、显影及结果判读的详细步骤,用于检测目标蛋白表达。 RNA-seq/Chip-seq(简介): 简要介绍这些高通量技术在干细胞研究中的应用,为进阶读者提供指引。 功能性鉴定: 集落形成试验(CFU-assay): 详细说明用于评估造血干细胞或间充质干细胞生成集落能力的实验方法。 三系分化能力验证: 详细介绍体外诱导ESCs/iPSCs向外胚层(如神经元)、中胚层(如心肌细胞、骨细胞)和内胚层(如肝细胞、胰腺细胞)分化的经典方法和常用培养方案。 干细胞定向分化技术: 分化诱导策略: 详细介绍通过调控培养基成分(如生长因子、小分子抑制剂、代谢物)或细胞微环境来诱导干细胞向特定谱系分化的方案。 常用分化谱系实验指南: 提供针对特定分化细胞(如神经元、心肌细胞、胰岛β细胞、肝细胞、软骨细胞、成骨细胞等)的详细培养方案、分化诱导时间、标志物鉴定方法以及功能性评估(如电生理记录、心肌收缩、激素分泌等)。 分子机制研究: 结合前沿研究,简要介绍如何通过敲低或过表达关键基因来调控干细胞分化方向。 第四部分:干细胞相关实验技术与质量控制 本部分扩展了干细胞研究的实用技术,并强调质量控制的重要性: 细胞活性与增殖能力评估: MTT/CCK-8/EdU 测定: 提供细胞增殖和活力的检测方法,评估培养条件对细胞生长的影响。 细胞周期分析(流式): 介绍如何通过PI染色和流式细胞术分析细胞周期,了解细胞增殖状态。 细胞迁移与侵袭能力评估: 划痕实验: 详细说明如何评估细胞的迁移能力。 Transwell 实验: 提供评估细胞侵袭能力的详细方案。 基因工程技术在干细胞中的应用: 基因转染与稳定细胞株的建立: 介绍脂质体、电穿孔、病毒载体等转染方法,以及如何筛选稳定表达目标基因的细胞株。 CRISPR/Cas9 基因编辑技术: 简要介绍CRISPR/Cas9在干细胞基因编辑中的应用,如基因敲除、敲入、点突变等,以及相关的鉴定方法。 质量控制与数据管理: 细胞系的稳定性监测: 强调定期检测关键标志物的表达,以确保细胞系未发生退化或污染。 实验数据记录与管理: 提供科学规范的实验记录和数据管理建议,确保研究的可重复性和可靠性。 伦理与安全考量: 简要提及干细胞研究中的伦理问题和生物安全防护要求。 本书特点: 操作性强: 每一步骤都力求详细,配以必要的参数设置和注意事项,避免盲点。 图文并茂: 关键步骤和结果将配以清晰的图示或照片,便于理解。 理论与实践结合: 在讲解实验操作的同时,穿插必要的理论解释,帮助读者知其然更知其所以然。 前沿性: 涵盖了当前干细胞研究中的热门技术和方向。 针对性: 明确目标读者群体,确保内容满足专业需求。 《干细胞实验指南》致力于成为每一位投身于干细胞研究领域的科研工作者的得力助手,助您在探索生命奥秘的道路上事半功倍。

作者简介

目录信息

读后感

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用户评价

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我是一名实验室的技师,负责日常的实验操作和维护。在接触这本书之前,我对干细胞的很多操作都只是“照葫芦画瓢”,并没有深入理解其中的原理。这本书的出现,彻底改变了我的工作方式。 书中对于实验操作的精细化指导,是我最看重的部分。例如,在细胞的分离和纯化章节,书中详细介绍了不同组织样本的处理方法,以及如何选择合适的酶消化和密度梯度离心参数来获得高纯度的目标细胞。我之前在分离骨髓间充质干细胞时,常常遇到细胞活性不高的问题,对照书中内容后,我才发现原来酶的浓度和消化时间需要根据样本的新鲜程度进行调整。 书中的图文并茂,让我对实验过程有了更直观的认识。那些清晰的显微镜图像和操作示意图,能够帮助我快速掌握关键步骤,避免不必要的失误。我把这本书当作日常工作的“操作宝典”,遇到不确定的步骤,都会先翻阅一下。 此外,书中关于实验耗材的选择和使用,也给了我很多启发。例如,在细胞培养基的准备环节,书中详细介绍了不同品牌血清的质量差异,以及如何选择合适的添加剂来优化培养条件。这让我意识到,即使是看似简单的耗材,也可能对实验结果产生重大影响。 这本书也让我更加注重实验的标准化和规范化。书中强调了记录实验过程的重要性,并提供了一些实用的记录模板。这让我的工作变得更有条理,也便于我与科研人员进行有效的沟通和协作。现在,我们实验室的很多实验操作流程,都是参照这本书进行优化的。

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读完这本书,我最大的感受就是它非常“接地气”。我之前参加过一些干细胞的线下培训,虽然理论讲得很精彩,但回到实验室自己动手时,却常常无从下手,或者遇到一些意想不到的问题。这本书不同,它就像一位经验丰富的老教授,在你身边手把手地教你做实验。 比如,在讲到细胞计数和活性检测时,书中并没有简单地说“用血球计数板计数”,而是详细介绍了不同计数方法(如锥虫蓝染色法、MTT法等)的原理、操作细节、优缺点,以及如何根据不同的实验目的选择合适的方法。我之前一直用一种方法,结果发现结果不够准确,对照书中内容后,我才意识到原来还有更适合我情况的其他方法,并且在书中找到了详细的步骤。 书中在讨论细胞传代和冻存时,也特别强调了细节的重要性。它详细介绍了不同细胞系的传代比例、消化时间、离心速度等参数,以及冻存和复苏过程中需要注意的温度和速度控制。我曾经因为细胞冻存不当导致复苏率极低,浪费了很多宝贵的细胞,看了这本书之后,我才意识到之前的一些操作是有误的,并且学会了如何正确地冻存和复苏细胞,大大提高了实验的成功率。 更让我印象深刻的是,书中对实验过程中可能出现的“坑”进行了详细的预警和指导。比如,在无菌操作环节,书中列举了多种可能导致污染的途径,并提供了相应的预防措施。在处理细胞生长异常时,书中也提供了非常实用的排查思路和解决方案,让我不再害怕面对实验中的各种意外情况。 这本书的语言风格也非常平实易懂,没有过多的专业术语堆砌,即使是初学者也能轻松理解。而且,书中给出的许多建议,都来自于作者和科研团队的实际经验,非常有借鉴意义。我感觉,这本书不仅教会了我如何做实验,更教会了我如何思考实验。

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这是一本非常有价值的书籍,尤其对于我这样对干细胞研究充满好奇,但又缺乏系统性知识背景的跨领域研究人员而言。我是一名生物信息学背景的研究者,希望将我的数据分析能力应用于干细胞相关的研究中,但对于实验操作的理解一直是个薄弱环节。 这本书在实验设计的逻辑性和可行性方面,给出了非常清晰的指导。它不仅仅是罗列步骤,而是强调了每一个实验设计背后的科学Rationale,以及如何根据研究问题来构建合理的实验流程。我常常在构思新的研究项目时,会反复翻阅书中的相关章节,学习如何设计更有效的实验来验证我的假说。 书中在实验数据的解读和统计分析方面,也提供了非常有益的见解。虽然我的专长是数据分析,但书中对实验结果的呈现方式、统计方法的选择,以及如何避免数据解读中的常见误区,都让我受益匪浅。我学习到了如何在与实验人员沟通时,使用更准确的语言来描述和讨论实验结果。 另外,书中对于各种常用干细胞技术的原理和应用场景的梳理,让我对整个干细胞研究领域有了更宏观的认识。比如,在学习CRISPR-Cas9基因编辑技术与干细胞结合的应用时,我不仅了解了其基本原理,更看到了它在疾病建模、药物筛选等方面的巨大潜力。这极大地激发了我将生物信息学与这些前沿技术相结合的兴趣。 这本书的结构安排也很合理,从基础的细胞培养到复杂的基因操作,循序渐进,逻辑清晰。每一个章节的独立性也很强,可以根据自己的需求来查阅。我经常会把这本书放在手边,遇到不确定的问题,就能迅速找到答案。

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这本书不仅仅是关于“如何做”干细胞实验,更是关于“为什么这样做”以及“如何做得更好”。作为一名刚刚组建了自己独立实验室的PI,我深知技术细节的重要性,但更重要的是,我需要为我的团队构建一个高效、可靠的研究体系。 书中对于不同实验技术的原理和最新进展的介绍,为我实验室的研究方向提供了重要的参考。例如,在学习iPSC诱导分化的技术时,书中不仅罗列了各种常用的方案,还对不同方案的优劣势、适用范围进行了深入的比较分析,这帮助我为我的团队选择了最适合我们研究目标的诱导方案,大大节省了摸索的时间。 书中对于质量控制和数据管理的强调,也给我留下了深刻的印象。它详细介绍了如何在实验的各个环节建立有效的质量控制点,以及如何规范地记录和管理实验数据。这对于我们实验室规范化运作,保证研究结果的可靠性和可重复性至关重要。我已经在实验室内部推行了书中关于数据记录和管理的标准。 此外,书中在实验结果的解读和科学写作方面,也提供了非常有价值的建议。它教会我们如何更清晰、更有逻辑地呈现我们的研究成果,以及如何在学术论文中更好地阐述我们的发现。这对于提升我们实验室的学术产出质量有着直接的帮助。 总而言之,这本书是我实验室构建初期不可或缺的指导工具。它不仅为我的团队提供了扎实的技术基础,更重要的是,它为我们提供了一种严谨、科学的研究思维模式。我非常愿意将这本书推荐给任何想要在干细胞领域有所建树的研究者。

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这本书的出版,无疑给想要涉足干细胞领域的研究者提供了一份宝贵的参考。我是一名刚刚接触干细胞研究的博士生,之前对这方面知识了解甚少,也曾因为实验操作的繁琐和结果的不确定性而感到焦虑。在阅读了这本书之后,我仿佛找到了指路明灯。书中对于干细胞的分离、培养、鉴定以及分化等关键步骤,都进行了详尽的阐述,并且配有清晰的流程图和实验照片,这对于新手来说,极大地降低了学习的门槛。 我尤其欣赏书中在实验设计和结果分析方面的建议。作者并没有简单地罗列操作步骤,而是深入浅出地讲解了每一步实验背后的原理,以及可能遇到的问题和相应的解决方案。例如,在细胞培养部分,书中详细介绍了不同类型干细胞的培养基配方、培养条件以及污染的预防措施。当我遇到培养基配制错误导致细胞生长缓慢时,立刻能对照书中内容找到问题所在,并及时调整。 书中的另一大亮点在于其对前沿研究的梳理。作者并非仅仅停留在基础操作层面,而是巧妙地将最新的研究进展融入其中,例如在细胞重编程、基因编辑与干细胞结合的应用等方面,都给予了读者一定的启发。这让我意识到,仅仅掌握实验技术是远远不够的,理解其背后的科学逻辑和研究前沿同样至关重要。 对于已经有一定干细胞研究基础的同行,这本书同样具有很高的参考价值。书中在一些复杂实验技术,如诱导多能干细胞(iPSC)的制备和分化,以及某些特定类型的干细胞(如间充质干细胞、神经干细胞)的应用,都给出了更深入的探讨和优化建议。我曾经在iPSC分化神经元的过程中遇到瓶颈,通过参考书中针对不同分化诱导方案的比较分析,我找到了更适合我研究体系的方法,显著提高了分化效率和特异性。 总的来说,这本书不仅是一本操作手册,更是一本能够引导读者深入理解干细胞科学的百科全书。它涵盖的知识面广,但又足够深入,能够满足不同层次读者的需求。对于想要在这个领域有所建树的研究者来说,这本书绝对是值得人手一本的良师益友。

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很坑爹的一本书,国产的就是不行

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