免疫组织化学和分子生物学常用实验技术 pdf epub mobi txt 电子书 下载 2026

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出版者:人民卫生出版社

作者:王学民 田乃增

出品人:

页数:139

译者:

出版时间:2002-1

价格:11.00元

装帧:

isbn号码:9787117049283

丛书系列:

图书标签:

• 东野圭吾
• 免疫组织化学
• 分子生物学
• 实验技术
• 病理学
• 生物医学
• 免疫学
• 细胞生物学
• 诊断技术
• 研究方法
• 实验室技术

《生命密码：现代生物学研究的基石》 简介： 本书深入探索现代生命科学领域至关重要的实验技术，旨在为生物学、医学、药学等相关专业的研究人员、学生以及对生命科学充满好奇的读者提供一份详尽的指引。我们不局限于某一特定技术分支，而是将目光投向更广阔的生命探索图景，着重介绍那些能够揭示细胞、组织乃至整个生命体奥秘的通用性、基础性研究方法。通过对这些关键技术的理解和掌握，读者将能够更好地解读生命现象，解决生物学难题，并在各自的研究领域取得突破。 第一章：分子生物学的基石——核酸的研究与操作 本章节将聚焦于生命遗传物质——核酸（DNA和RNA）的提取、纯化、定量与分析。我们将详细阐述多种从不同生物材料中高效获取高质量核酸的方法，包括但不限于使用商业化的试剂盒以及经典的化学提取方法，并重点讨论不同方法在不同样本类型（如血液、组织、细胞、微生物等）上的适用性和优缺点。 核酸的提取与纯化： 从细胞裂解到核酸沉淀，我们将一一解析关键步骤。从选择合适的裂解液、酶（如蛋白酶K、RNase）的使用，到酚-氯仿抽提、基因组DNA提取试剂盒、RNA提取试剂盒（如Trizol法、离心柱法）的操作流程，以及去除抑制剂、获得高纯度核酸的技巧，都将进行深入的介绍。对于RNA的提取，我们将特别强调其脆弱性以及如何防止降解，包括无菌操作、使用RNase抑制剂、以及分化基因组DNA和总RNA的策略。 核酸的定量与质量评估： 获得核酸后，准确评估其浓度和纯度是后续实验成功的关键。本节将介绍多种定量方法，包括紫外-可见分光光度法（OD260/280值、OD260/230值）、荧光定量法（如Qubit、Picogreen），并讨论不同方法的原理、灵敏度和适用范围。此外，我们还将讲解如何通过琼脂糖凝胶电泳来评估核酸的完整性，以及是否存在降解或污染物。 核酸的酶促反应： 深入剖析核酸研究中常用的酶促反应，例如限制性内切酶的消化原理、选择和应用；DNA连接酶在构建重组DNA分子中的作用；DNA聚合酶在PCR扩增、DNA测序等过程中的催化机制。读者将了解不同酶的功能、最佳反应条件以及在实验设计中的注意事项。 核酸的电泳分析： 琼脂糖凝胶电泳和聚丙烯酰胺凝胶电泳是分离和分析核酸的经典技术。本节将详细讲解这两种电泳方法的原理、凝胶配制、电泳缓冲液的选择、DNA/RNA的标记与可视化（如EB染色、SYBR Green染色、银染），以及如何根据核酸的大小和电荷进行分离和鉴定。我们将探讨它们在DNA片段分析、RNA完整性检测、PCR产物鉴定等方面的应用。 第二章：蛋白质的世界——表达、纯化与鉴定 蛋白质是生命活动的主要执行者，理解蛋白质的结构、功能及其调控对于揭示生命机制至关重要。本章将系统介绍蛋白质研究中最常用、最核心的技术，帮助读者掌握从蛋白质的表达、纯化到定性的全过程。 蛋白质的表达系统： 介绍多种用于蛋白质表达的系统，包括原核表达系统（如大肠杆菌）、真核表达系统（如酵母、哺乳动物细胞、昆虫细胞）以及体外转录-翻译系统。详细分析各系统的特点、优势、局限性，以及在选择表达系统时需要考虑的因素，如蛋白质的复杂性、溶解性、翻译后修饰等。 融合蛋白的构建与表达： 重点讲解如何设计和构建融合蛋白，例如His标签、GST标签、MBP标签等，以及这些标签在蛋白质纯化和检测中的作用。我们将介绍常用的原核和真核载体，以及如何通过基因克隆技术将目标蛋白基因插入表达载体。 蛋白质的沉淀与溶解： 探讨影响蛋白质溶解度的因素，如pH、盐浓度、去污剂、变性剂等。介绍优化蛋白质溶解和提取的策略，以及如何从细菌细胞、哺乳动物细胞、组织中高效地提取细胞内蛋白或分泌蛋白。 蛋白质的纯化技术： 详细介绍多种常用的蛋白质纯化方法，包括亲和层析（如His标签层析、GST层析）、离子交换层析、疏水层析、尺寸排阻层析等。阐述每种层析方法的原理、填料选择、洗脱条件优化，以及如何根据目标蛋白的性质设计纯化策略。我们将提供实际操作的步骤和注意事项，并讨论如何组合使用多种层析技术以获得高纯度的目标蛋白。 蛋白质的定量： 介绍几种常用的蛋白质定量方法，如Bradford法、BCA法、Lowry法以及紫外吸收法。分析这些方法的原理、灵敏度、特异性以及适用范围，并提供实验操作的细节和数据解读。 SDS-PAGE电泳分析： 深入讲解SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳（SDS-PAGE）的原理、凝胶配制、电泳条件设置、样品制备（如还原性、非还原性）以及电泳条带的染色（如考马斯亮蓝、银染）和结果分析。SDS-PAGE是评估蛋白质纯度和分子量的重要手段，本节将提供详细的操作指南和常见问题排除。 蛋白质印迹（Western Blotting）： 详细阐述Western Blotting的技术流程，包括样品制备、SDS-PAGE电泳、蛋白转膜（湿转、半干转、干转）、封闭、一抗和二抗的孵育、显色检测等各个环节。重点讲解一抗和二抗的选择、稀释度的优化、信号增强方法，以及如何根据检测目标对Western Blotting进行优化。 第三章：生命活动的可视化——细胞与组织学研究 本章将聚焦于将抽象的分子信号转化为可见的细胞和组织结构，从而深入理解生命活动的发生和发展。我们将介绍能够可视化细胞和组织特征的关键技术。 细胞培养技术： 涵盖原代细胞培养、细胞系培养、无菌操作技术、培养基的配制与选择、细胞的传代与冻存、细胞的鉴定与质量控制。详细介绍不同类型细胞（如贴壁细胞、悬浮细胞、干细胞）的培养特点和注意事项。 细胞固定与透化： 讲解固定（如甲醛固定、乙醇固定）的原理和方法，旨在保存细胞形态和生物分子。介绍透化（如Triton X-100、皂素）的作用，以允许抗体或其他探针进入细胞内部。 荧光标记技术（免疫荧光）： 详细阐述免疫荧光（IF）的原理，包括抗原-抗体特异性结合以及荧光染料标记。介绍不同荧光染料（如FITC, TRITC, Cy3, Cy5）的性质和选择。详细讲解免疫荧光实验步骤，包括封闭、一抗二抗孵育、洗涤、封片、荧光显微镜观察。重点讨论多重免疫荧光染色技术，以及荧光信号的采集与分析。 共聚焦显微镜成像： 介绍共聚焦显微镜的原理，它如何通过选择性聚焦来获得高分辨率的图像，减少背景干扰。讲解共聚焦显微镜的操作技巧，以及如何利用其进行三维重建和定量分析。 细胞凋亡检测： 介绍多种常用的细胞凋亡检测方法，如Annexin V-FITC/PI染色结合流式细胞术，TUNEL染色法，以及Caspase活性检测等。阐述这些方法的原理、实验操作步骤、结果解读以及在研究细胞凋亡机制中的应用。 第四章：分子相互作用的探索——信号转导与调控机制 生命活动离不开复杂的分子相互作用网络。本章将介绍用于研究蛋白质-蛋白质相互作用、蛋白质-核酸相互作用以及信号通路激活机制的关键技术。 酵母双杂交（Yeast Two-Hybrid, Y2H）系统： 详细讲解Y2H系统的原理，如何利用转录因子DNA结合域（BD）和激活域（AD）来筛选和鉴定蛋白质-蛋白质相互作用。介绍Y2H系统的实验设计、载体选择、转化、筛选策略以及结果的验证。 免疫共沉淀（Co-Immunoprecipitation, Co-IP）技术： 阐述Co-IP技术的原理，如何利用特异性抗体捕获包含相互作用蛋白的复合物。详细介绍实验操作步骤，包括抗体选择、孵育条件、洗涤、下游检测（如Western Blotting）等。探讨Co-IP在验证和分析蛋白质复合物组成中的应用。 ChIP（Chromatin Immunoprecipitation）技术： 详细介绍ChIP技术，用于研究蛋白质与DNA之间的特异性结合。阐述实验流程，包括细胞固定、染色质片段化（酶切或超声）、抗体免疫沉淀、DNA提取、PCR或高通量测序（ChIP-seq）分析。重点讨论ChIP在研究转录因子结合位点、组蛋白修饰等方面的应用。 激酶活性检测： 介绍多种检测激酶活性的方法，如放射性底物磷酸化法、荧光或化学发光底物法、以及基于抗体检测磷酸化水平的方法。阐述不同方法的原理、适用性以及在信号通路研究中的重要性。 信号通路报告基因检测： 讲解如何利用报告基因（如荧光蛋白、荧光素酶）来监测信号通路的激活状态。介绍常用的信号通路报告基因载体，以及如何通过转染、药物处理和荧光/发光检测来评估信号通路活性。 第五章：基因的调控与编辑——基因表达与操纵 本章将深入探讨基因层面的调控机制，以及当前最前沿的基因编辑技术，为理解基因功能和开发新的治疗策略提供技术支持。 基因表达的调控： 介绍转录调控（如转录因子、启动子、增强子）、转录后调控（如RNA剪接、mRNA稳定性、miRNA调控）、翻译调控（如核糖体结合位点、密码子偏好性）以及表观遗传调控（如DNA甲基化、组蛋白修饰）等多种层面。 siRNA/shRNA介导的基因沉默： 详细讲解siRNA（小干扰RNA）和shRNA（短发夹RNA）在诱导基因特异性沉默中的作用机制。介绍siRNA/shRNA的设计、递送（如转染、病毒载体）以及评估基因沉默效率的方法。 CRISPR-Cas9基因编辑技术： 详细介绍CRISPR-Cas9系统的基本原理、构成要素（Cas9核酸酶、向导RNA）。讲解CRISPR-Cas9在基因敲除、基因敲入、基因校正等方面的应用。重点讨论CRISPR-Cas9的优势、局限性、脱靶效应以及优化策略。 基因递送技术： 介绍多种基因递送方法，包括物理方法（如电穿孔、基因枪）、化学方法（如脂质体、聚合物）以及生物方法（如病毒载体）。分析不同递送方法的效率、特异性、安全性以及在不同应用场景下的选择。 结论： 《生命密码：现代生物学研究的基石》旨在为读者提供一个全面而深入的技术平台。通过学习和掌握本书介绍的各类实验技术，读者将能够独立设计和执行高水平的生物学研究项目，从而在不断发展的生命科学领域中，解锁更多的生命奥秘，为人类健康和科技进步贡献力量。本书强调技术的普适性和基础性，致力于成为所有致力于探索生命本质的研究者和学习者的宝贵工具。

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这本书给我最大的感受是其知识体系的宏大和覆盖面的广博，它不仅仅停留在基础的技术层面，更是试图构建一个从抗体制备到信号放大的完整知识链条。对于我们这些希望进行多学科交叉研究的人来说，这种系统性非常有价值。它将免疫学与分子生物学的交叉点剖析得非常透彻，比如如何利用FISH技术与免疫组化进行双重甚至多重标记，书中对此有深入的讨论，展示了如何通过精确的探针设计来避免信号交叉干扰。作者的行文风格非常注重逻辑的连贯性，使得即使是跨越多个技术平台的内容，读者也能很容易地跟上思路。然而，对于那些对软件操作不甚熟悉的读者，书中提及的某些高级定量分析方法可能会成为一道理解上的门槛，因为这些部分的文字描述略显晦涩，缺少了实操界面截图的辅助，略显单薄。总体而言，这本书是一部扎实的学术参考资料，需要读者投入大量精力去消化，但一旦掌握，其回报是巨大的。

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这本书的排版和语言风格非常专业，给人一种严谨可靠的感觉，但对于那些希望快速获取核心信息的读者来说，可能需要一些耐心。它的优点在于对细节的极致追求，每一个实验参数的选择都有明确的依据。我尤其喜欢它对不同组织样本处理差异的详细阐述。毕竟，在实际操作中，肾脏组织和神经组织对固定液和通透剂的需求是截然不同的，这本书把这些“经验之谈”系统化地记录了下来，避免了我们走很多弯路。不过，我也注意到，某些关键的分子生物学背景知识点讲解得相对简略，这可能要求读者本身需要具备一定的生物化学和细胞生物学基础。例如，在讨论酶联免疫反应中HRP的催化机制时，如果能配上更直观的化学反应图示，对于理解底物选择的原理会更有帮助。总的来说，它更像一本厚重的工具书，需要使用者静下心来细细品味，而不是快速翻阅的指南。

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说实话，我期待这本书能带来更深层次的理论突破，但读完之后，我发现它更偏向于“操作手册”的定位，尽管内容编排得极为细致。它在实验技术细节上的把握确实令人称赞，从样本处理到信号检测的每一个环节，都有详尽的说明。然而，对于一些前沿的研究方向，比如如何结合最新的分子生物学技术来优化免疫组化的特异性和灵敏度，书中探讨得略显保守。我希望看到更多关于新型标记物应用、或者与高通量筛选技术结合的案例分析。书中的很多经典实验流程虽然可靠，但对于追求更高效率和更低背景的资深研究者来说，可能略显传统。比如，在荧光免疫组化部分，对于共定位分析的最佳实践和定量方法介绍得不够深入，更多的是定性的描述。如果能加入一些最新的图像分析软件的应用指南和统计学考量，这本书的价值会更上一层楼，真正实现从“会做实验”到“做好研究”的跨越。

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这本书简直是实验室操作的百科全书！我刚开始接触免疫组化这个领域时，面对各种复杂的步骤和试剂，真是感到无从下手。这本书的清晰详尽的图文并茂的讲解，彻底改变了我的困境。它不仅仅罗列了步骤，更深入地解释了每一步背后的原理。比如，关于抗体选择和优化那一部分，作者深入浅出地分析了不同类型抗体的特性及其对实验结果的影响，这对于初学者来说简直是黄金知识。我特别欣赏其中关于“假阳性”和“假阴性”原因分析的章节，它不仅教我们如何避免这些问题，更重要的是，教会我们如何像一个真正的研究者那样去思考和排查问题。书中的实验流程设计得非常合理，每一步都考虑到了潜在的干扰因素，让我能够信心满满地开始我的实验。特别是对于那些需要精细控制的步骤，比如抗原修复条件的选择，书中给出了详细的参数范围和调整建议，这比查阅零散的文献资料要高效得多。这本书无疑是新手入门的利器，也是老手提升技巧的宝典。

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作为一名从事病理诊断多年的技术人员，我非常看重实验结果的可重复性。这本书在“质量控制”和“疑难问题解决”方面的篇幅设置，恰恰抓住了我们工作的痛点。书中针对染色不均、非特异性背景过高等常见问题，提供了一套近乎“流程化”的排查清单，每一步都指导我们去验证可能出错的环节，从洗涤液的渗透性到封片剂的兼容性，无一遗漏。这种系统性的故障排除方法，极大地提升了我的工作效率和信心。相比于许多只关注“如何做”而忽略“为什么会错”的教材，这本书展现了作者丰富的临床实践经验。它教会我们的不仅是技术，更是一种严谨的科学态度——对每一个微小差异都保持警惕。唯一的小遗憾是，对于新型的自动化染色设备的操作和系统维护方面的内容略显不足，这些现代化的工具正在越来越多地进入我们的工作流程，期待未来版本能与时俱进地涵盖这些内容。

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