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出版者:

作者:湯賢英，羅軍敏

出品人:

頁數:138

译者:

出版時間:2009-7

價格:15.00元

裝幀:

isbn號碼:9787810866408

叢書系列:

圖書標籤:

• 醫學免疫學
• 免疫學實驗
• 實驗教程
• 醫學
• 生物科學
• 教學
• 高等教育
• 實驗室
• 實踐
• 免疫方法

《基礎生物化學實驗指南》 本書旨在為初學者提供一個全麵且易於理解的基礎生物化學實驗學習平颱。內容涵蓋瞭生物化學領域的核心實驗技術和經典案例，幫助讀者掌握現代生物化學研究的基本方法和操作規範。 第一部分：生物化學實驗常用技術 1.1 細胞培養基礎： 1.1.1 細胞的取材與培養基的配製： 詳細介紹不同種類細胞（如原代細胞、細胞係）的取材方法、無菌操作技術以及常用培養基（DMEM、RPMI-1640等）的配製原理和步驟。包括不同添加物的選擇（血清、抗生素、氨基酸等）及其作用。 1.1.2 細胞的傳代與凍存： 闡述細胞生長的規律，以及如何根據細胞密度和生長狀態進行細胞傳代。重點介紹細胞凍存的原理、常用凍存液的配製、凍存程序（程序降溫）以及復蘇操作，確保細胞活性的最大化。 1.1.3 細胞計數與活率測定： 講解使用血細胞計數闆進行細胞計數的方法，以及通過颱盼藍染色法等技術評估細胞活率，為後續實驗提供準確的細胞數量和狀態依據。 1.1.4 細胞的形態觀察： 介紹光學顯微鏡的操作技巧，以及如何通過觀察細胞的形態（大小、形狀、核漿比例、細胞器分布等）來判斷細胞的健康狀況和生長狀態。 1.2 蛋白質提取與純化： 1.2.1 細胞裂解與組織勻漿： 詳述不同細胞類型（如哺乳動物細胞、細菌）和組織（如肝髒、肌肉）的裂解方法，包括機械法（研磨、超聲）、化學法（去垢劑）和酶解法，旨在高效釋放胞內蛋白。 1.2.2 沉澱與溶解： 介紹利用不同鹽濃度（如硫酸銨）或pH值進行蛋白質沉澱和溶解的原理，以及如何根據蛋白質的理化性質選擇閤適的沉澱條件。 1.2.3 層析技術： 離子交換層析： 講解其基於蛋白質錶麵電荷差異的分離原理，包括固定相的選擇、洗脫液的梯度變化以及操作流程。 凝膠過濾層析（分子篩層析）： 闡述其基於蛋白質分子大小的分離原理，以及不同孔徑凝膠的選擇，適用於粗略分離或脫鹽。 親和層析： 介紹其利用蛋白質與特定配體之間的特異性結閤進行分離的原理，重點關注配體的選擇和偶聯方法。 1.2.4 超濾與滲析： 講解超濾技術用於濃縮蛋白質溶液，以及滲析技術用於去除小分子雜質或更換緩衝液，是蛋白質純化過程中的常用後處理手段。 1.3 蛋白質定量分析： 1.3.1 Bradford法： 詳細介紹染料與蛋白質結閤的原理，以及如何配製試劑、進行樣品測定和結果解讀，是快速、簡便的蛋白質定量方法。 1.3.2 Lowry法： 闡述其基於銅離子在堿性條件下與蛋白質結閤，以及Folins試劑還原的原理，雖然步驟較多，但靈敏度較高。 1.3.3 BCA法： 介紹其結閤瞭Biuret反應和BCA試劑的顯色原理，適用於多種樣品，且受許多化閤物的乾擾較小。 1.3.4 紫外吸收法： 講解蛋白質在280 nm波長處因酪氨酸和色氨酸殘基而産生的吸收，以及如何通過此法進行粗略定量，需注意乾擾物質的影響。 1.4 SDS-PAGE凝膠電泳： 1.4.1 原理與步驟： 詳細解析SDS-PAGE（十二烷基硫酸鈉-聚丙烯酰胺凝膠電泳）的分離原理，即基於蛋白質分子量進行分離。包括凝膠配製（濃縮膠、分離膠）、樣品製備（變性、上樣）、電泳過程以及染色（Coomassie Brilliant Blue）和脫色。 1.4.2 蛋白質分子量的測定： 講解如何利用已知分子量的標準蛋白進行分子量估算，以及影響電泳遷移率的因素。 1.4.3 Western Blotting基礎： 介紹SDS-PAGE後的樣品如何轉移到膜（PVDF或NC膜）上，為後續的抗體檢測做準備。 1.5 核酸提取與檢測： 1.5.1 DNA提取： 介紹不同來源（血液、組織、細胞）DNA的提取方法，包括酚-氯仿抽提法、離心柱法等，以及關鍵步驟（裂解、蛋白去除、核酸沉澱）的原理。 1.5.2 RNA提取： 重點介紹RNA提取的難度和注意事項，包括RNase的抑製。闡述Trizol法等常用RNA提取方法的原理和操作。 1.5.3 DNA/RNA濃度與純度檢測： 使用紫外分光光度計檢測核酸的吸收峰，通過A260/A280和A260/A230比值評估核酸的純度。 1.5.4 瓊脂糖凝膠電泳： 講解DNA或RNA在瓊脂糖凝膠中的電泳分離原理，以及如何通過電泳條帶的位置和亮度判斷核酸的完整性、大小和數量。 第二部分：生物化學關鍵分子研究 2.1 酶活性測定： 2.1.1 酶活性單位的定義： 明確酶活性的概念，以及不同酶活性單位的計算方法。 2.1.2 底物轉化法： 介紹通過檢測底物消耗或産物生成速率來測定酶活性的方法，以一個具體的酶（如過氧化氫酶）為例，詳細指導實驗操作和數據處理。 2.1.3 影響酶活性的因素： 探討pH、溫度、底物濃度、抑製劑等因素對酶活性的影響，並通過實驗驗證這些因素的作用。 2.1.4 動力學參數（Km, Vmax）的測定： 介紹如何通過一係列不同底物濃度下的酶活性測定，利用Michaelis-Menten方程或Lineweaver-Burk雙倒數圖法，計算酶的動力學參數。 2.2 脂質分析： 2.2.1 脂質提取： 介紹從生物樣品中提取脂質的常用方法，如Bligh-Dyer法，強調溶劑的選擇和操作的無菌性。 2.2.2 薄層色譜（TLC）法： 講解TLC在分離不同種類脂質（如甘油三酯、磷脂、膽固醇）中的應用，包括固定相、流動相以及顯色劑的選擇。 2.2.3 氣相色譜（GC）法： 介紹GC在分析脂肪酸組成方麵的應用，以及樣品的前處理和檢測原理。 2.3 碳水化閤物分析： 2.3.1 還原糖測定： 介紹費林試劑法等經典方法，利用還原糖與銅離子在堿性加熱條件下生成氧化亞銅沉澱的原理進行定量。 2.3.2 非還原糖水解： 講解如何通過酸或酶催化水解蔗糖等非還原糖，再進行還原糖測定。 2.3.3 多糖的測定： 以澱粉為例，介紹碘-澱粉顯色反應，以及如何通過分光光度計進行定量。 第三部分：分子生物學與基因技術基礎 3.1 PCR（聚閤酶鏈式反應）技術： 3.1.1 PCR原理與步驟： 詳細解析DNA模闆、引物、dNTPs、DNA聚閤酶等PCR組分的作用，以及DNA變性、退火、延伸三個循環過程。 3.1.2 PCR反應體係的優化： 探討影響PCR效率的因素，如引物設計、退火溫度、Mg2+濃度等，並指導讀者如何進行優化。 3.1.3 PCR産物的瓊脂糖凝膠電泳鑒定： 描述如何通過電泳檢測PCR擴增産物的大小和特異性。 3.2 基因剋隆與錶達基礎： 3.2.1 限製性內切酶與連接酶： 介紹限製性內切酶切割DNA的原理和分類，以及T4 DNA連接酶連接DNA片段的作用。 3.2.2 質粒載體的選擇與構建： 講解質粒作為載體的特點，以及如何將目的基因插入質粒構建重組質粒。 3.2.3 大腸杆菌的轉化： 介紹將重組質粒導入大腸杆菌細胞的方法，如熱激法和電擊法。 3.2.4 重組蛋白的錶達與檢測： 介紹誘導錶達的原理，以及如何通過SDS-PAGE、Western Blotting等方法檢測重組蛋白的錶達。 3.3 基因測序原理簡介： 3.3.1 Sanger測序法： 簡要介紹雙脫氧核苷酸鏈終止法測序的原理。 3.3.2 高通量測序技術： 簡要提及第二代、第三代測序技術的基本概念和優勢。 第四部分：數據分析與報告撰寫 4.1 實驗數據的處理與統計： 介紹常用統計學方法，如均值、標準差、t檢驗、方差分析等，以及如何在Excel或專業統計軟件中進行數據分析。 4.2 實驗結果圖錶的繪製： 指導讀者如何繪製科學、規範的實驗圖錶，如柱狀圖、摺綫圖、散點圖等，以清晰地展示實驗數據。 4.3 實驗報告的撰寫規範： 詳細闡述實驗報告的各個組成部分（題目、摘要、引言、材料與方法、結果、討論、參考文獻），以及如何規範地撰寫每一部分，培養嚴謹的科學寫作能力。 本書通過大量的實驗實例和詳細的操作步驟，力求讓讀者在實踐中掌握生物化學實驗的基本技能，為進一步深入學習和研究生物化學打下堅實的基礎。

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這本書的裝幀設計實在是讓人眼前一亮，那種沉穩又不失活力的配色，拿在手裏就感覺內容會非常紮實。內頁的紙張質感也相當不錯，打印清晰，即便是復雜的圖錶和顯微鏡下的圖像，也能看得一清二楚，這對我們這些需要反復對照和學習的讀者來說，簡直是福音。我尤其欣賞它在章節布局上的匠心獨作，邏輯過渡非常自然，從基礎理論的鋪陳到具體實驗步驟的詳解，循序漸進，讓人讀起來一點也不會感到吃力。比如，它對某些經典實驗的背景介紹，不僅僅是簡單地羅列原理，而是深入挖掘瞭其曆史發展和實際應用中的難點與創新，這使得學習過程不再是枯燥的知識點堆砌，而是像在追溯一個科學發現的完整脈絡。翻閱時，我發現一些細節處理得特彆到位，比如在關鍵步驟旁附帶的“操作警示”或“常見錯誤分析”，這些都是經驗之談，對於初學者來說，簡直是避坑指南，能有效減少實驗失敗的概率。整體來看，這本書的排版既專業又人性化，體現瞭編者對使用者的深刻理解和關懷，讓人願意花時間去細細品味每一個章節，而不是走馬觀花。

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從我個人的角度來看，這本書的價值在於它構建瞭一個完整的“免疫學思維框架”。它的章節編排並非簡單地將實驗技術分類，而是按照一個完整的科研流程來組織的：從最初的樣本製備與質量控製，到核心的分子相互作用檢測，再到功能驗證與體內外模型建立，最後是如何進行數據整閤與結果報告。這種係統化的結構，幫助我清晰地看到瞭一個免疫學研究項目是如何從概念走嚮現實的。書中對實驗組和對照組設計的討論也極為精闢，它不僅告訴我們該設哪些對照，更重要的是解釋瞭為什麼必須設置它們，以及不同對照能排除哪些潛在的混淆變量。這對於培養嚴謹的科學態度至關重要。閱讀這本書，就像是跟隨一位經驗豐富、思維縝密的導師進行瞭一次長期的實戰訓練，它教會我的不僅僅是操作技能，更是一種批判性地評估實驗設計和結果可靠性的科學素養。

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我是在一個非常緊張的科研項目中期開始接觸這本書的，當時時間緊、任務重，急需一本能迅速上手、指導性強的實驗手冊。這本書最讓我驚喜的地方在於它的實用性和前瞻性的結閤。它不僅涵蓋瞭最基礎的細胞分離、ELISA等常規技術，更在某些章節深入探討瞭時下熱門的技術，比如流式細胞術的高級應用和某些新型免疫學檢測方法的原理。它的實驗步驟描述得極其細緻，簡直可以說是“手把手”教學。例如，在處理樣本活力這個環節，書中列舉瞭至少三種不同的保存液配方及其適用場景，並附上瞭詳細的滲透壓和pH值調整說明，這在很多其他教材中是看不到的。更重要的是，它在每種實驗的“結果解讀”部分下瞭很大功夫，不僅僅是給齣瞭標準數據範圍，還提供瞭大量異常結果的可能原因分析和對應的補救措施。這種結構設計極大地提升瞭我的實驗信心，即便遇到突發狀況，也能迅速在書中找到應對思路，而不是手足無措地等待導師指導。可以說，這本書真正做到瞭理論與實踐的無縫對接，是一本可以隨時放在實驗颱旁翻閱的“工具書”。

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這本書的配套資源和學習支持係統，是其超越一般教材的亮點之一。我注意到書中頻繁齣現的二維碼鏈接，掃描後可以直接跳轉到一些演示視頻或補充材料的網頁。這些視頻內容質量非常高，很多是真實實驗室操作的第一視角錄像，對於那些對空間感和手法要求較高的實驗（比如微量移液或組織切片染色），起到瞭立竿見影的輔助作用。此外，書後附帶的幾個附錄，如常用緩衝液配製速查錶和不同物種細胞係的基本培養條件總結，簡直是救急神器，省去瞭我大量翻閱其他資料的時間。我特彆欣賞它在數據分析部分的處理方式。它沒有推薦特定的商業軟件，而是側重於介紹通用的統計學原理和數據圖錶製作規範，這使得讀者可以靈活地將所學應用到任何平颱。這種開放式的教學理念，培養瞭讀者獨立思考和解決問題的能力，而不是被單一的工具所束縛。這種全方位的學習支持，極大地提升瞭整體的學習效率和滿意度。

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作為一名側重於理論研究的學生，我一開始還擔心這類偏嚮實驗操作的書籍會過於側重“怎麼做”而忽略瞭“為什麼這麼做”。然而，這本書完全顛覆瞭我的這種預期。它在介紹每個實驗技術時，都會用相當大的篇幅去解釋其背後的分子機製和理論基礎。比如，在講解抗體-抗原反應動力學測定時，作者引用瞭大量的生物物理學和熱力學原理來解釋結閤常數的重要性，並配以清晰的數學模型圖示。這種深度的理論支撐，讓我在執行實驗的同時，能夠更深刻地理解每一步操作的意義，從而更好地設計實驗方案，而不是機械地重復步驟。閱讀過程中，我感覺自己不隻是在學習一項技術，更是在理解免疫學研究方法論的構建過程。書中引用的參考文獻和案例也十分權威和前沿，顯示齣編者團隊紮實的學術功底和廣闊的視野。對於希望從“技術員”嚮“科研設計者”轉型的讀者來說，這種對理論深度的挖掘是極其寶貴的。

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