Peptide Analysis Protocols (Methods in Molecular Biology) pdf epub mobi txt 电子书下载 2026

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出版者:Humana Press

作者:Ben M. Dunn

出品人:

页数:352

译者:

出版时间:1994-11-07

价格:USD 114.50

装帧:Plastic Comb

isbn号码:9780896032743

丛书系列:Methods in Molecular Biology

图书标签:

Peptides
Mass Spectrometry
Proteomics
Chromatography
Bioanalysis
Protein Chemistry
Analytical Chemistry
Biotechnology
Molecular Biology
Amino Acid Sequence

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具体描述

In this second volume of a two-volume set, state-of-the-art methods are given for the analysis of peptides. Leading authorities provide reproducible protocols for peptide analysis using HPLC, capillary zone electrophoresis, mass spectrometry, UV and fluorescence spectroscopy, to name a few. The authors describe the procedures in a practical, step-by-step fashion suitable for both experts or novices. The chapters also include a helpful notes section offering troubleshooting tips, alternative procedures, details on substituting unavailable materials, and informative explanations about why certain steps are necessary. These extra measures help to guarantee the successful outcome of your experiments. Dunn and Pennington's "Peptide Analysis Protocols" offers a comprehensive collection of standard, readily reproducible methods for many procedures that will enable scientists in every area of biochemical and biological research to analyze those peptides that have been synthesized in the laboratory.

肽段分析的精细工艺：一份深入的实验指南书籍简介本书是理解和执行复杂肽段分析实验的宝贵资源，其内容围绕着分子生物学研究中最常用、最有效的方法论展开。它并非仅仅是技术的罗列，而是深入解析每一步操作背后的科学原理、潜在陷阱以及优化策略，旨在指导研究人员从容应对从样品制备到数据解读的全过程。本书的核心在于其对实验技术的详尽阐述。它涵盖了从高质量肽段制备的关键步骤，到利用多种先进分析工具解读其复杂性的各个方面。无论您是初涉蛋白质组学领域的新晋研究者，还是经验丰富的科学家寻求完善特定实验环节，都能从中找到高度实用且可操作的指导。内容概述：第一部分：高质量肽段制备是分析的基石样品获取与处理：本部分强调了起始样品质量的重要性，并提供了从不同来源（如细胞裂解物、组织提取物、体液等）获取蛋白质的标准化方法。重点在于如何最大程度地保留蛋白质的完整性，避免降解和交叉污染。蛋白质酶解：这是肽段分析中最关键的步骤之一。本书详细介绍了各种常用酶（如胰蛋白酶、赖氨酸特异性肽酶C、金黄色葡萄球菌蛋白酶V8等）的选择标准、酶解条件优化（包括pH、温度、时间、酶与底物比例），以及如何处理疏水性或高分子量蛋白质的酶解难题。特别之处在于，本书会深入探讨不同酶解策略对后续肽段库覆盖度的影响，并提供防止非特异性切割和二聚体形成的技术。样品纯化与富集：为了提高信噪比，本书详细介绍了各种肽段纯化和富集技术。这包括但不限于：反相高效液相色谱（RP-HPLC）：从粗酶解液中分离肽段，并优化梯度洗脱条件以获得更佳的分离度。固相萃取（SPE）：快速有效地去除盐类、去污剂和其他可能干扰后续分析的杂质。亲和层析：针对特定修饰肽段（如磷酸化肽段、乙酰化肽段）的富集策略，详细阐述了配体选择、结合条件和洗脱方案。等电聚焦（IEF）和二维电泳（2DE）：用于蛋白质的初步分离和鉴定，以及随后从凝胶中提取和消化肽段。第二部分：精密检测与识别肽段的先进技术液相色谱-串联质谱（LC-MS/MS）：这是肽段分析的“金标准”。本书将深入解析：色谱分离：详细介绍各种色谱柱（如C18、C8）的选择，流动相优化，以及梯度设计对分离度和峰形的影响。质谱仪原理与选择：讲解不同类型的质谱仪（如Q-TOF、Orbitrap、LTQ-Orbitrap等）的工作原理，以及如何根据实验需求选择最合适的仪器。数据采集模式：详细阐述全扫描（Full Scan）和碎片扫描（MS/MS Scan）模式，以及它们在肽段识别中的作用。深入探讨了数据依赖性采集（DDA）和数据独立性采集（DIA）的优劣势，并提供了选择最佳采集策略的指导。离子源优化：包括电喷雾电离（ESI）和基质辅助激光解吸电离（MALDI）的原理与优化，以及如何提高离子化效率。肽段定性与定量：肽段鉴定：详细介绍如何使用各种肽段数据库搜索软件（如Mascot, Sequest, Andromeda, MaxQuant等）进行肽段鉴定。强调了对搜索参数的理解和设置，以及如何评估鉴定结果的可靠性（如FDR控制）。肽段定量：涵盖多种定量策略，包括：标签定量：如SILAC（稳定同位素标记的氨基酸掺入）、iTRAQ（异体标记定量）和TMT（多同位素标记）。本书将详细阐述标记过程、样品混合、色谱分离和质谱分析，以及如何进行定量数据分析。无标签定量：如基于峰面积（Peak Area）或峰高度（Peak Height）的相对定量。绝对定量：结合标准品或内标进行绝对肽段丰度测定。质谱数据分析与解读：蛋白质组数据整合：如何将来自不同分析的质谱数据整合，并进行全面的蛋白质组学分析。生物信息学工具的应用：介绍常用的蛋白质组学数据分析软件和数据库，如UniProt, GO, KEGG等，以及如何利用它们进行功能富集分析、通路分析等。统计学分析：确保定量结果的可靠性和统计学显著性。数据可视化：如何通过图表（如火山图、热图、散点图）直观地展示和解读分析结果。第三部分：特定肽段分析的进阶技巧翻译后修饰（PTM）的鉴定与定量：详细介绍如何鉴定和定量各种重要的PTM，如磷酸化、乙酰化、甲基化、糖基化、泛素化等。这包括： PTM富集策略：如IMAC（金属离子亲和层析）富集磷酸化肽段，抗体捕获等。质谱分析的特殊考虑：如低丰度PTM肽段的检测，如何通过特定的碎片模式识别PTM。 PTM数据库和分析工具。蛋白质-蛋白质互作（PPI）研究：介绍如何通过质谱技术识别和研究蛋白质之间的互作。包括：共免疫沉淀（Co-IP）结合LC-MS/MS。酵母双杂交（Y2H）的补充。亲和纯化-质谱（AP-MS）技术。循环肽段分析：针对具有特定三维结构和功能的循环肽段，提供专门的制备和分析策略。小分子肽段分析：重点关注具有生物活性的短肽，以及它们的鉴定和定量。本书的独特之处：本书的价值在于其高度的实用性和细节性。它不仅仅是罗列步骤，而是深入讲解每一步背后的原理，并提供解决实际操作中可能遇到的问题的建议。每一个实验方案都附有详细的图表、流程图和示例数据，便于读者理解和复现。此外，本书还强调了数据质量控制和结果解释的重要性，帮助研究人员避免常见的错误，并最终获得可靠、有意义的实验结果。无论您是在探索疾病的分子机制，发现新的生物标志物，还是开发新的药物靶点，本书都将是您在肽段分析领域不可或缺的强大助手。它将引导您掌握从容应对复杂肽段分析的精细工艺，从而推动您的研究迈向新的高度。