Matrix Metalloproteinase Protocols pdf epub mobi txt 电子书下载 2026

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出版者:Humana Pr Inc

作者:Clark, Ian M. 编

出品人:

页数:576

译者:

出版时间:2000-12

价格:$ 168.37

装帧:HRD

isbn号码:9780896037335

丛书系列:

图书标签:

Matrix Metalloproteinases
MMPs
Proteolysis
Enzyme Assays
Cell Biology
Biochemistry
Molecular Biology
Drug Discovery
Cancer Research
Inflammation

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具体描述

Leading experts detail proven laboratory techniques for the study of MMPs. The methods include those for the expression and purification of MMPs and TIMPs, for the detection of MMPs and TIMPs at both the protein and mRNA levels, and for the assay of MMP and TIMP activities in a wide variety of circumstances. Each method includes step-by-step instructions and notes variant applications and pitfalls to avoid. A selective overview of the MMP arena spells out where the field has been, where it is, and where it is going. Comprehensive and highly practical, "Matrix Metalloproteinase Protocols" brings together the long and hard-earned experience of master experimentalists that will allow not only novices to get up to speed quickly, but also add to the repertoire of successful techniques in expert laboratories.

生物化学与分子生物学前沿技术精粹：细胞信号传导与蛋白质组学分析导言：探索生命活动的核心机制生命科学的进步，很大程度上依赖于我们对细胞内部复杂事件的精确解析能力。本书聚焦于当前生物化学和分子生物学领域中最具活力和挑战性的两个方向：细胞信号传导的调控网络以及高通量蛋白质组学的深度应用。这两大领域是理解生命现象、疾病发生机制以及开发新型生物疗法的基石。本书并非针对单一酶类或特定分子通路，而是提供一个宏观而深入的视角，涵盖从基础理论构建到尖端实验技术操作的完整流程。第一部分：信号传导的精细调控：从膜上受体到核内应答细胞信号传导是生命体实现对环境刺激快速、精确响应的机制。本部分将系统阐述信号通路中的关键节点和调控机制，重点关注那些控制细胞增殖、分化、凋亡以及代谢重编程的核心分子事件。第一章：受体酪氨酸激酶（RTKs）的激活与下游级联本章深入剖析细胞表面受体酪氨酸激酶（RTKs）家族的结构特征、配体结合后的二聚化过程以及随后的自磷酸化事件。重点讨论如何利用表面等离子共振（SPR）技术定量分析配体-受体结合动力学，并详细介绍通过免疫共沉淀（Co-IP）和磷酸化位点特异性抗体来追踪激活的信号分子，例如PI3K/Akt/mTOR通路和Ras/Raf/MEK/ERK通路。讨论内容将涵盖如何利用定点突变技术解析特定磷酸化位点在信号传递中的具体功能。第二章：G蛋白偶联受体（GPCRs）的复杂信号整合 GPCRs是最大的膜蛋白家族，介导了绝大多数生理反应。本章将侧重于GPCRs的信号转导机制，包括G蛋白亚基的解离与激活、第二信使（如cAMP、IP3和Ca²⁺）的产生及其在细胞内的扩散与效应。我们探讨如何使用荧光钙探针（如Fura-2或Fluo-4）进行实时钙离子成像，以监测细胞对瞬时刺激的动态反应。此外，本章还会介绍BRET/FRET技术在评估GPCRs与其他信号蛋白（如Arrestins）相互作用时的应用，揭示信号的脱敏与再激活机制。第三章：细胞骨架的动态重塑与信号的机械耦合信号传导并非仅限于分子层面，机械力在细胞命运决定中扮演关键角色。本章将探讨细胞骨架（微管、微丝和中间纤维）如何作为信号的“支架”和“传导线”。内容涉及荧光标记蛋白追踪技术和原子力显微镜（AFM）在测量细胞刚度和分析细胞外基质相互作用中的应用。我们将详细介绍整合素信号通路与细胞粘附斑点蛋白之间的复杂调控关系，以及其对细胞迁移和形态发生的影响。第二部分：蛋白质组学的高效分析：从鉴定到功能解析蛋白质是执行生命功能的分子实体，理解其在特定生理或病理状态下的表达、修饰和相互作用是现代生物学的核心任务。本部分旨在提供一套从样本制备到数据解析的完整、高精度的蛋白质组学工作流程。第四章：高分辨率质谱技术的原理与样本制备本章将深入探讨现代液相色谱-串联质谱（LC-MS/MS）在蛋白质组学中的基础应用。重点讲解Tandem Mass Tag (TMT) 和 iTRAQ 等相对定量技术在比较不同处理组或疾病状态下蛋白质表达谱上的优势与局限。同时，提供详尽的样本制备指南，包括细胞裂解液的优化、去噪、以及针对低丰度蛋白质（如膜蛋白或磷酸化蛋白质）的富集策略，如亲和层析法和金属离子螯合亲和层析（IMAC）。第五章：蛋白质相互作用组的解析策略蛋白质功能往往在与其他分子形成复合物后才能体现。本章系统介绍鉴定蛋白质复合物的实验策略。除了经典的双杂交系统（Y2H）和酵母展示技术外，我们将详细阐述稳定同位素标记的亲和纯化-质谱（SILAC-AP-MS）技术，用于精确识别特定蛋白质的直接和间接相互作用伙伴。讨论内容将涵盖如何区分生理性相互作用和非特异性粘附，以及如何利用蛋白质芯片技术对已知蛋白质家族进行高通量筛选。第六章：蛋白质翻译后修饰（PTMs）的深度挖掘蛋白质翻译后修饰是细胞调控最精妙的手段之一。本章着重介绍识别和定位关键PTMs（如磷酸化、泛素化、乙酰化和糖基化）的先进技术。我们将详述“一维肽段分离结合亲和富集”的串联策略，并介绍如何利用特定修饰的抗体进行免疫沉淀（p-PTM IP），随后通过高分辨率质谱进行分析。此外，本章还将介绍如何结合生物信息学工具进行PTM位点预测和功能注释，从而阐明修饰对蛋白质活性和稳定性的影响。结论：整合性研究范式的构建本书的最终目标是引导读者建立一种整合性的研究范式，即将对特定信号通路的深入分子理解，与对整体蛋白质表达和修饰状态的全面认知相结合。通过掌握和应用这些前沿技术，研究人员能够更全面地描绘细胞在健康与疾病状态下的动态图景，为生物医学研究提供强有力的技术支撑。