具体描述
本书由美国冷泉港实验室出版社组织国际权威实验室的专家共同研讨并撰稿,是对其10年前广受赞誉的第一版的全新修订。全书共8篇,分别介绍了PCR方法(包括RT-PCR方法)基本原理,样品制备,引物设计,PCR产物的检测,PCR介导的克隆,PCR法制备突变体,以及利用PCR进行基因的差异表达分析,RNA样品的PCR方法等。书后还附有方便实用的附录和索引。 对于分子生物学、生物化学、遗传学、免疫学、细胞生物学、医学等生命科学基础学科以及分子流行病学、临床检验、法医鉴定等应用领域,无论是PCR的初学者,还是有经验的科研人员,都将会发现这本手册是一部详尽、可靠的实验指南。
作者简介
目录信息
1 建立一个PCR实验室
2 PCR残留污染的处理:一种酶学策略
3 高保真PCR酶
4 PCR的最优化和常见问题解析
5 富含GC片段的PCR扩增
6 精确扩增大片段的技巧
7 PCR引物设计
8 PCR扩增DNA的非放射性循环测序
第2篇 样品的制备
9 DNA的纯化
10 RNA的纯化
11 激光捕获微分离技术原位定位基因表达
12 克服PCR受抑制的策略
第3篇 RT-PCR方法
13 相对定量RT-PCR和竞争定量RT-PCR内对照的使用
14 四种实时PCR检测系统的比较:Bio-Rad I-Cycler、ABI、7700、Roche LightCycler、the Cepheid Smartcycler
15 定量PCR的新技术
16 RNA的扩增:用镁激活的热稳定DNA聚合酶进行高温反转录和DNA扩增
第4篇 PCR产物的检测:专门应用
17 杂合性的丢失:一种鉴定肿瘤基因组上染色体区段缺失的多重PCR方法
18 单链构象多态性分析
19 逆转录酶原位PCR
20 灵敏快速的突变检测方法——错配位点的固相化学切割法
第5篇 用PCR分析基因的差异表达
21 PCR在基于微阵列的基因表达分析中的应用
22 利用抑制性消减杂交技术鉴定差异表达的基因
23 基因表达分析中的荧光mRNA差异显示技术
第6篇 用PCR进行克隆
24 以PCR为基础的文库筛选方法
25 经典RACE(cDNA末端快速扩增)法的改进
26 用PCR合成和分析DNA文库
第7篇 PCR产物的克隆
27 克隆PCR产物的策略
28 PCR产物双向和定向克隆
29 核糖克隆:用含有一个核糖核苷酸末端的PCR引物进行DNA克隆和基因构建
第8篇 利用PCR进行诱变
30 诱变PCR
31 快速PCR定点突变
32 利用PCR来突变和合成新的重组基因
33 流线型基因装配PCR
附录1 专利
附录2 在PCR中使用的寡核苷酸的修饰
附录3 注意事项
附录4 供应商
索引
· · · · · · (收起)
读后感
用户评价
这本书的排版布局实在让人有些抓狂,页边距设置得过于狭窄,导致文字内容显得非常拥挤,尤其是在包含大量公式或长句子的段落中,阅读起来需要花费额外的精力去追踪光标的位置。更糟糕的是,很多重要的图表,比如扩增曲线的对比图或凝胶电泳结果示例,被放置在了离其文本描述很远的位置,我必须不停地翻页来核对图示与文字的对应关系,这极大地打断了我的阅读和理解节奏。在信息密度已经很高的实验指南中,清晰的布局和合理的图表定位是提高效率的关键。虽然内容本身可能包含了价值不菲的知识点,但糟糕的排版设计,无疑给知识的有效传递设置了不必要的物理障碍,让原本应该高效的学习过程,变成了一种费力的“寻宝游戏”。
我对这本书的整体编排逻辑感到有些困惑,感觉像是把各种知识点生硬地拼凑在一起,缺乏一个流畅的叙事主线。章节之间的衔接非常突兀,前一节还在讲基础原理,下一节突然就跳到了高级应用的优化参数,中间缺少了必要的过渡和铺垫,这对于初学者来说无疑是巨大的挑战。举个例子,在讨论引物设计那一部分,作者似乎默认读者已经完全掌握了Tm值的计算和二级结构预测的软件操作,直接就给出了所谓的“最佳实践”,但对于这些实践背后的生物学意义和数学原理却着墨不多,使得整个部分读起来像是一份缺乏解释的菜谱。我不得不频繁地在搜索引擎和其它参考资料之间来回切换,才能勉强弄清楚某些步骤的来龙去脉。如果能有一位经验丰富的导师在旁为你讲解,或许还能理解,但仅凭这本书本身,阅读体验确实称不上是顺畅的“指南”。
这本书的实用性绝对是值得称赞的,尤其是在实验方案的细节描述上,达到了近乎偏执的程度。我特别欣赏它在“故障排除”部分所花费的心血,那些常见问题和罕见的“疑难杂症”都被详尽地列了出来,并且提供了多角度的解决方案。比如,当出现“条带模糊”或者“非特异性扩增”时,书中不仅仅给出了常规的缓冲液浓度调整建议,还深入探讨了模板DNA纯度对PCR效率的影响,甚至细致到推荐了不同品牌的DNA提取试剂盒在特定样本上的表现差异。这种深度和广度,让我在实际操作中少走了很多弯路,感觉就像是身边多了一位经验超过二十年的资深实验员在随时待命。对于需要经常处理复杂样本或进行方法学验证的人来说,这种细致入微的指导简直是无价之宝,它真正体现了“指南”二字应有的重量。
从学术深度来看,这本书似乎更侧重于“操作手册”的功能,而不是对该领域前沿进展的全面综述。我希望能够看到更多关于近年来新兴的数字PCR(dPCR)技术与传统实时荧光定量PCR(qPCR)在理论上的辩证分析,以及它们各自在基因组学研究中的最新应用案例。书中对基础的热循环程序设定、酶的选择性、以及模板浓度优化等经典内容讲解得非常到位,但似乎对那些突破性的化学修饰引物技术、或新型荧光染料的性能对比分析则一笔带过,显得有些保守和滞后。这使得它更像是一本为大专或本科生设计的入门教材,对于已经在进行高难度科研项目的人来说,其提供的理论深度可能略显不足,更像是一种对“标准流程”的复述,而非对“创新方向”的启迪。
这本书的装帧设计倒是挺赏心悦目的,封面采用了一种比较沉稳的深蓝色调,字体选择也显得专业又不失现代感,初次拿到手里的时候,确实给人一种“干货满满”的期待感。内页的纸张质感出乎意料地好,不是那种廉价的泛黄纸,印刷清晰度非常高,即便是涉及到复杂的图形和表格,细节也毫不含糊。装订方式看起来很结实,那种可以完全摊平的设计对于实验操作来说简直是福音,谁也不想在满手试剂的时候还要费力地去按住书页不合拢。不过,说实话,如果只是从视觉和触感上来判断,它绝对算得上是实验室必备工具书中的“颜值担当”了。至于内容本身,我还在探索阶段,但就其外在的品质而言,已经为后续的学习打下了一个非常好的基础印象。期待接下来的内容能和这精美的外壳一样,经得起推敲。