具体描述
现代分子生物学技术与实践 本书将带领读者深入探索当代生命科学研究的核心领域——分子生物学技术。我们聚焦于那些在基因、蛋白质及其相互作用研究中不可或缺的、且具有前沿性的实验方法，旨在提供一个既具理论深度又富含操作细节的实用指南。 --- 第一部分：基础核酸操作与分析的精进 本部分专注于构成生命遗传信息的核酸（DNA与RNA）的提取、修饰与定量分析技术。我们不再满足于基础的琼脂糖凝胶电泳，而是深入探讨高分辨率分离技术及其在复杂样本处理中的应用。 第一章：高纯度核酸的获取与质量控制 高质量的核酸是所有后续分子实验成功的基石。本章详述了从不同生物材料（如植物组织、细菌、哺乳动物细胞系乃至福尔马林固定石蜡包埋组织（FFPE））中提取基因组DNA、质粒DNA和总RNA的优化流程。 组织匀浆与裂解的差异化策略： 针对富含多糖、多酚或蛋白质的样本，我们将详细对比机械破碎（如研磨、高压匀浆）与化学裂解（如使用胍盐、酚氯仿体系）的优缺点及最佳配比。 RNA的稳定化与降解控制： 重点介绍RNase的广泛存在性及其抑制策略，包括使用DEPC水、专用缓冲液和即时冷冻技术。特别关注微量RNA（如miRNA）的提取纯化方案。 核酸质量的量化与评估： 不仅限于Nanodrop或Qubit的浓度测定，我们深入探讨了Agilent Bioanalyzer/TapeStation在评估RNA完整性指数（RIN值）和DNA片段大小分布上的应用，以及如何解读这些数据以指导下游实验设计。 第二章：聚合酶链式反应（PCR）的深度拓展 PCR技术已成为分子生物学的“瑞士军刀”，但其复杂性在于对特异性和效率的精准控制。 实时定量PCR（qPCR）的定量偏差分析： 详细阐述了SYBR Green法和TaqMan探针法的原理差异、扩增效率的校准方法（标准曲线的建立与评估），以及内参基因选择与归一化处理的严谨性要求。 高保真与长片段PCR： 介绍新型高保真DNA聚合酶的选择标准，以及针对高GC含量模板或极长基因片段扩增的“退火温度梯度优化”与“热启动技术”的改进。 数字PCR（dPCR）的定量革命： 阐述dPCR相对于qPCR在绝对定量、稀有突变检测方面的优势，并对比微流控芯片与液滴生成系统的操作差异。 第三章：分子克隆与载体构建的自动化趋势 传统克隆方法的繁琐性正被高效的体外组装技术所取代。 基于同源重组的无缝克隆技术： 深入解析Gibson Assembly、In-Fusion等技术的反应机制、片段设计原则以及适用范围，重点讨论如何构建多片段、复杂表达载体。 CRISPR/Cas9系统的载体设计与递送： 详细介绍gRNA的靶向设计原则（脱靶效应评估）、单链RNA（scRNA）与双链RNA（dsRNA）载体的选择，以及病毒载体（腺相关病毒AAV、慢病毒LV）的包装与滴度测定。 序列验证与错误筛查： 阐述Sanger测序、二代测序（NGS）文库制备在验证克隆体中的应用，以及如何利用生物信息学工具进行序列比对与突变确认。 --- 第二部分：蛋白质组学与相互作用研究的前沿技术 本部分聚焦于对生命活动执行者——蛋白质的研究，涵盖其表达水平分析、结构解析以及动态相互作用的捕获。 第四章：蛋白质的提取、分离与质谱分析基础 蛋白质组学依赖于高效的分离技术和灵敏的检测手段。 复杂蛋白质样本的优化提取： 探讨针对膜蛋白、细胞骨架蛋白及磷酸化蛋白的专用裂解缓冲液配方（如使用脲或硫脲），以及如何有效去除高丰度背景蛋白（如血清白蛋白）的预处理技术。 二维电泳（2-DE）的高分辨率分离： 深入解析等电聚焦（IEF）的参数设置，如何在高分辨率下应对蛋白质的修饰差异，以及凝胶图像的数字化分析流程。 液相色谱-串联质谱（LC-MS/MS）的数据解析： 侧重于蛋白质鉴定与定量分析的工作流程，包括酶切策略（胰酶、Glu-C）的选择、肽段的碎片化模式识别，以及数据处理软件（如MaxQuant, Proteome Discoverer）的参数调优。 第五章：蛋白质修饰与靶向研究 蛋白质功能往往由其翻译后修饰（PTMs）所调控。 磷酸化蛋白质的富集技术： 详细介绍使用金属离子亲和层析（IMAC）、磷酸基团特异性抗体或TiO2微球对低丰度磷酸化肽段进行选择性捕获的实验细节。 泛素化与乙酰化分析： 探讨如何利用特异性抗体或带有“标签”的纯化试剂来捕获泛素化或乙酰化修饰位点。 蛋白质的共价标记与成像： 介绍生物正交化学（Bioorthogonal Chemistry）的应用，如Click Chemistry在活细胞内标记特定氨基酸或糖链的方法，以及荧光共振能量转移（FRET）在监测蛋白构象变化中的应用。 第六章：蛋白质相互作用组的捕获与验证 理解蛋白质如何协同工作是揭示细胞信号通路的关键。 亲和纯化与蛋白质组学（AP-MS）： 重点讲解如何设计具有功能性标签（如FLAG, HA, Strep-tag II）的表达系统，确保标签不干扰目标蛋白的天然相互作用。详细描述洗脱条件的梯度优化，以最大程度减少非特异性吸附。 酵母双杂交（Y2H）系统的构建与筛选： 介绍“有核（Nuclear-based）”和“分泌型（Secreted-based）”Y2H系统的优缺点，以及如何通过共表达构建具有对照组的筛选体系，有效区分真实互作与假阳性。 表面等离子共振（SPR）技术定量分析： 阐述SPR在实时、无标记地测定蛋白质间结合/解离速率（kon/koff）及平衡解离常数（Kd）的应用，并讨论配体固定化策略对结果的影响。 --- 第三部分：细胞功能分析与高通量成像 本部分关注在更接近生理环境的活细胞体系中，对基因功能和细胞事件进行动态、定量的观察和分析。 第七章：细胞培养与无菌操作的进阶规范 对细胞的培养条件进行精细化控制，是获得可重复结果的前提。 特殊细胞系培养的挑战： 针对原代细胞、干细胞（iPSC/ESC）和悬浮培养细胞的营养需求差异，详细介绍不同血清替代品（如B27, N2）的配制与培养基的无血清化策略。 支原体污染的快速检测与根除： 阐述PCR检测支原体污染的标准流程，并提供成熟的化学清除方案或抗生素联合疗法。 共聚焦显微镜的光谱分离与图像去卷积： 深入讲解多色荧光标记实验中，如何通过设置合适的激发/发射波长组合避免串扰（Crosstalk），以及使用去卷积算法提高图像的信噪比与空间分辨率。 第八章：流式细胞术与细胞分选（FACS）的定量应用 FACS是分析细胞群体异质性的强大工具。 多参数荧光补偿与补偿矩阵的建立： 详述如何通过单阳性对照管精确计算补偿值，以确保高维数据分析的准确性。 细胞周期分析与凋亡检测： 重点介绍PI染色与BrdU标记在周期分析中的应用，以及Annexin V/7-AAD双染法在早期、晚期凋亡区分中的敏感性控制。 细胞分选（Sorting）的优化： 讨论不同细胞荷电量和粘附性对分选效率的影响，并介绍如何利用脉冲形状分析（Pulse Shape Analysis）来排除细胞碎片和双联体。 第九章：体内基因功能研究的动物模型构建 本部分侧重于整合基因编辑技术，在活体动物模型中验证基因功能。 转基因与基因敲除鼠的微注射技术： 详细描述囊胚注射所需的卵母细胞采集、受精、显微操作环境的准备，以及如何通过嵌合体分析确认靶向性。 Cre-LoxP系统的时空控制： 介绍不同启动子驱动的Cre小鼠品系的特性，以及如何设计“双报告”系统来精确追踪细胞谱系（Lineage Tracing）。 基因功能分析的体内指标： 讨论在动物模型中，如何结合行为学测试、代谢组学和组织病理学分析，全面评估基因功能缺失或过表达的表型。 --- 本书力求在每个实验环节提供可重复性和可扩展性的操作指导，面向具备一定分子生物学基础的研究人员、博士生及技术人员，是实验室技术升级与新项目启动的必备参考书。
作者简介
目录信息
读后感
评分
评分
评分
评分
评分
用户评价
评分
评分
评分
评分
评分
相关图书
本站所有内容均为互联网搜索引擎提供的公开搜索信息，本站不存储任何数据与内容，任何内容与数据均与本站无关，如有需要请联系相关搜索引擎包括但不限于百度，google,bing,sogou 等
© 2026 qciss.net All Rights Reserved. 小哈图书下载中心 版权所有